Sérologická diagnostika syfilitickej infekcie. Moderné laboratórne metódy a algoritmy na diagnostiku syfilisu. Ako interpretovať testy na syfilis

Taxonómia Borrelia, Leptospira a Treponema a názvy chorôb nimi spôsobených.

Čeľaď: Spirochaetaceae

Rod: Borrelia

Druh: B. recurrentis - pôvodca epidemickej recidivujúcej horúčky.

Rod: Treponema

Druh: T. pallidum - pôvodca syfilisu

Rod: Leptospira

Druh: L. Icterohaemorrhagiae - pôvodca leptospirózy

Mikroskopická diagnostika syfilisu.

Mikroskopia v tmavom poli: pred štúdiou sa odoberie tkanivová tekutina zo spodnej časti vredu alebo bodky lymfatickej uzliny. Pripraví sa prípravok rozdrvenej kvapky: kvapka testovaného materiálu sa nanesie do stredu podložného sklíčka, kvapka sa prekryje krycím sklíčkom, aby nevznikali vzduchové bubliny. Pozitívny výsledok: mikroskopické vyšetrenie odhaľuje treponémy s rovnomernými 8-12 veľkými kučeravkami. Vyznačujú sa plynulými rotačno-translačnými, kyvadlovými a flexnými pohybmi.Pri farbení podľa Romanovského-Giemsa: pôvodca syfilisu sa sfarbuje do bledoružova, ostatné treponémy sa sfarbujú do červenkastofialova.

Reakcie používané pri sérodiagnostike syfilisu. Všeobecné charakteristiky každého z nich.

RSK(Wassermanova reakcia): Komponenty: 1 systém - sérum pacienta, diagnostikum, komplement, CNI; 2 systém - hemolytické sérum a suspenzia ovčích erytrocytov. Pripraví sa 1 systém, inkubuje sa 1 hodinu pri 37 °C. Pridá sa druhý systém, inkubuje sa 1 hodinu pri 37 °C.Pozitívnym výsledkom je absencia hemolýzy.

RPGA: Komponenty: CNI, sérum pacienta, diagnostika erytrocytov. Pripravia sa riedenia séra, pridá sa diagnostikum, v termostate na 24 hodín 37 °C. Poschodie. výsledok: dáždnik.

ELISA: Komponenty: sérum pacienta, diagnostika, konjugát, chromogénny substrát. Diagnostikum sa spojí s plastom jamky tablety, pridá sa zriedené sérum, konjugát a substrát. Poschodie. výsledok: zmena farby podkladu.

Nepriamy RIF: AG sa aplikuje na sklíčko - bledý treponém (kmeň Nichols). Nátery sa sušia na vzduchu a fixujú sa v acetóne počas 5 minút. Sérum pacienta sa ochudobní o suspenziu nepatogénnych treponém kmeňa Reiter alebo sa zriedi v pomere 1:200, potom sa aplikuje na pripravené prípravky. Uchovávajte vo vlhkej komore pri 35 °C 30 minút (1 fáza). Nátery sa premývajú 10 minút v ICN a sušia sa. Ďalej sa na prípravok aplikuje kvapka fluorescenčného séra proti ľudskému globulínu a inkubuje sa vo vlhkej komore pri izbovej teplote počas 30 minút (fáza 2). Nátery sa premyjú ICN a vysušia. pozorované pod fluorescenčným mikroskopom. Pozitívna reakcia: zelená žiara.

Flokulačná reakcia na skle: krvná plazma alebo nezahriate sérum sa na podložnom sklíčku niekoľko minút mieša s nešpecifickým lipidovým antigénom. Pozitívny výsledok: zväčšené častice antigénu (flokulát) sú viditeľné pri malom zväčšení.

Sérodiagnostika syfilisu pomocou RPHA.

Komponenty: CNI, sérum pacienta, diagnostika erytrocytov. Pripravia sa riedenia séra, pridá sa diagnostikum, v termostate na 24 hodín 37 °C. Poschodie. výsledok: dáždnik.

Sérodiagnostika syfilisu pomocou ELISA.

Komponenty: sérum pacienta, diagnostikum, konjugát, chromogénny substrát. Diagnostikum sa spojí s plastom jamky tablety, pridá sa zriedené sérum, konjugát a substrát. Poschodie. výsledok: zmena farby podkladu.

Sérodiagnostika syfilisu pomocou RSK.

Wassermanova reakcia: môžete použiť krvné sérum pacienta a cerebrospinálny mok (v štádiu neurosyfilisu). Ako diagnosticum - treponémový alebo kardiolipínový antigén. Komponenty: 1 systém - sérum pacienta, diagnostikum, komplement, CNI; 2 systém - hemolytické sérum a suspenzia ovčích erytrocytov. Pripraví sa 1 systém, inkubuje sa 1 hodinu pri 37 °C. Pridá sa druhý systém, inkubuje sa 1 hodinu pri 37 °C.Pozitívnym výsledkom je absencia hemolýzy.

Metódy mikrobiologickej diagnostiky leptospirózy.

Bakterioskopická metóda: pripravte prípravok z rozdrvenej kvapky, študujte v mikroskope v tmavom poli: pohyblivé tenké vlákna s ohybmi na koncoch (sekundárne kučery) - vo forme zátvorky alebo písmena S.

Bakteriologická metóda: materiál - krv, moč, likvor. Materiál sa naočkuje (3-5 skúmaviek) v médiu voda-sérum, Fletcherovom médiu, Zemiaku. Inkubuje sa až 30 dní pri 28-30 °C v atmosfére CO2. Na detekciu rastu leptospiry sa 10 dní po inokulácii odoberie materiál zo skúmavky, pripraví sa prípravok drveného draslíka a študuje sa pod mikroskopom v tmavom poli. Zo skúmavky, kde bol zistený rast leptospiry, sa subkultivujú do 3 skúmaviek s čerstvým živným médiom, inkubujú sa 7-10 dní, teplota je rovnaká. Na diferenciáciu sa vykoná bikarbonátový test, stanoví sa hemolytická aktivita, aktivita fosfolipázy. Identifikované podľa antigénnej štruktúry pomocou aglutinačného séra.

biologický výskum: Morčatám sa intraperitoneálne podá 1 g testovaného materiálu a pozorujú sa mesiac, pričom sa zaznamenáva teplota a telesná hmotnosť, výskyt žltačky a krvácania, ako aj smrť zvieraťa.

Sérologická štúdia: AT v sére sa objavujú od 2 týždňov. Využite reakciu mikroaglutinácie a lýzy leptospiry. Sérum pacienta sa zriedi dvakrát od 1:100 do 1:1600. Do niekoľkých skúmaviek sa pridá 0,2 ml zriedeného séra a rovnaké množstvo živej kultúry kmeňov Leptospira. Inkubujte 1 hodinu pri 37 °C. Z obsahu každej skúmavky sa pripraví rozdrvený prípravok kvapiek a podrobí sa mikroskopii. Protilátky v sére prvých riedení spôsobujú lýzu - rozpúšťanie alebo granulárny opuch leptospiry. V následných riedeniach - aglutinácii - sa zhlukujú vo forme pavúkov. Diagnostická hodnota má pozitívnu reakciu v riedení 1:400 a viac.

1. Potekaev N.N., Frigo N.V., Almazova A.A., Lebedeva G.A. Epidemiológia syfilisu v moderných podmienkach. Klinické dermatológia A venerológia. 2015;1:22-34.
2. Larsen SA, Steiner BM, Rudolph AH. Laboratórna diagnostika a interpretácia testov na syfilis. Clin Microbiol Rev 1.-21. januára 1995.
3. Coles AC. Spirochaeta pallida. Metódy skúmania a detekcie, najmä pomocou tmavého podsvietenia. Br Med 1909;1:1117-1120.
4. Kellogg, DSJr, Mothershed SM. Imunofluorescenčná detekcia Treponema pallidum: Recenzia. JAMA 1969;107:938-941.
5. Mullis KB. Špecifická syntéza DNA in vitro prostredníctvom reťazovej reakcie katalyzovanej polymerázou. Meth Enzymol. 1987;155:335.
6. Centurion-Lara A. Detekcia Treponema pallidum citlivou reverznou transkriptázovou PCR. J Clin Microbiol. 1997;35;6:1348-1352.
7. Wassermann A, Neisser A, Brück C. Eine serodiagnostische Reaktion bei Syphilis. Dtsch Med Wochenschr. 1906;32:745-746.
8. Pangborn MC. Kardiolipín a jeho aplikácia v chemicky purifikovanom antigéne na sérodiagnostiku syfilisu. Proc N Y State Assoc Public Health Lab. 1946;26(1):26-29.
9. Pangborn MC. Štúdia zloženia kardiolipínu. FedProc. 1946;5(1 Pt 2):149.
10. Dmitriev G.A., Bragina E.E. Moderné metódy laboratórnej diagnostiky syfilisu. Časť I Bulletin dermatológie. 1996;2:29-33.
11. Dmitriev G.A., Bragina E.E. Moderné metódy laboratórnej diagnostiky syfilisu. Časť II. Bulletin dermatológie. 1996;3:33-38.
12. Nešpecifické pozitívne výsledky sérologických testov na syfilis. Kvantitatívne modifikácie moderných sérologických testov. Smernice. M. 1990.
13. Vyhláška Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie č. 87 z 26. marca 2001 "O zlepšení sérologickej diagnostiky syfilisu."
14. Ruská spoločnosť dermatovenerológov. Federálne klinické usmernenia pre liečbu pacientov so syfilisom. M. 2013.
15. Lyakhov V.F., Borisenko K.K., Potekaev N.S., et al. Dynamika treponémovo špecifickej imunoglobulinémie v skorých formách syfilisu. Bulletin dermatológie. 1990;8:38-42.
16. Kiseleva G.A., Tkachev V.K., Bednova V.N., et al. Porovnávacia štúdia citlivosti a špecifickosti troch enzýmových imunotestov určených na detekciu imunoglobulínov triedy M na pôvodcu syfilisu. Bulletin dermatológie. 2000;4:6-10.
17. Ermatová F.A. Stanovenie špecifických imunoglobulínov triedy M na včasnú diagnostiku syfilisu (klinická a laboratórna štúdia): Dis. … cukrík. med. vedy. M. 2014.
18. Mardanly S.G., Arsenyeva V.A., Aniskova I.N., Zhigalenko A.R. Domáci testovací systém "Line-Blot Syphilis-IgM" na detekciu IgM protilátok proti Treponema pallidum lineárnym imunoblotovaním Klinická dermatológia a venerológia. 2013;5:35-38.
19. Guseva S.N. Použitie testu IgM-RIFabs pri vyšetrovaní tehotných žien na aktivitu syfilitickej infekcie. Ruský časopis o kožných a pohlavných chorobách. 2004;6:60-63.
20. Ovchinnikov N.M., Bednová V.N., Delektorsky V.V. Laboratórna diagnostika pohlavne prenosných chorôb. M. 1987.
21. Lee K, Park H, Roh EY, Shin S, Park KU, Park MH, Song EY. Charakterizácia sér s nezhodnými výsledkami z reverzného sekvenčného skríningu na syfilis. Biomed Res Int. 2013;2013:269-347.
22. Binnicker MJ. Aký algoritmus by sa mal použiť na skríning syfilisu? Curr Opin Infect Dis. 2012 február;25(1):79-85.
23. Castro A, Jost H, Cox D, Fakile Y, Kikkert S, Tun Y, Zaidi A, Park M. Porovnanie analytickej úrovne zhody deviatich treponemálnych testov na syfilis a možných dôsledkov pre skríningový algoritmus. Otvorené BMJ. 19. septembra 2013;3(9).
24. Park IU, Chow JM, Bolan G, Stanley M, Shieh J, Schapiro JM. Skríning syfilisu pomocou treponemálneho imunotestu: analýza nezhodných sérologických výsledkov a dôsledky pre klinický manažment. J Infect Dis. november 2011;204(9):1297-1304.

Ruská národná výskumná lekárska univerzita. N.I. Pirogová

Dermatovenerologická klinika, Fakulta detského lekárstva

Správa na tému: Laboratórne metódy diagnostiky syfilisu

Vyplnil: Študent 440 v skupinách

Fakulta pediatrie

Seranov Igor Anatolievich

Netreponemálne štúdie

Treponemálne štúdie

Komplex na vykonávanie sérologických reakcií

Wassermanova reakcia

Imunofluorescenčná reakcia

imunitná adhézna reakcia

Treponema pallidum imobilizačná reakcia

Adsorpčná imunofluorescenčná reakcia Treponema pallidum

Hemaglutinačná reakcia

Prepojený imunosorbentový test

polymerická reťazová reakcia

Všetky sérologické výskumné metódy, ktoré sa dnes používajú, sú podmienene rozdelené do dvoch typov: netreponém, kvalifikácia (NTT) - a treponém, ktoré potvrdzujú prítomnosť patogénu (TT).Syfilis je veľmi ťažký, klinika je veľmi rozmazaná a nie vždy sa prejaví, preto sa na stanovenie správnej diagnózy používa niekoľko sérologických vyšetrení naraz. Pri vizuálnom potvrdení prítomnosti bledého treponému v odobratom materiáli (pomocou mikroskopu) sa diagnóza urobí okamžite a ďalšie vyšetrenia sa vykonávajú len zriedka.

Netreponemálne štúdie(testy) - NTT sú takzvané skríningové štúdie, nie sú veľmi drahé a s ich pomocou vyšetríte dosť veľké množstvo pacientov, navyše výsledky mnohých testov sú hotové veľmi rýchlo. Ale s falošným priebehom ochorenia, s nízkou citlivosťou sú takéto testy nepraktické a nemožno dosiahnuť 100% výsledok.

Pri dirigovaní netreponém testami v skúmanom materiáli sa zistia protilátky, ktoré reagujú s kardiolipín – lecitínový antigén. Jedným z prvých testov bola metóda založená na imunologickej Bordet-Jangu reakcii, kde ako antigén pôsobil pečeňový extrakt novorodenca, ktorý zomrel na syfilis. Dnes pri vykonávaní takýchto testov je antigén lecitín, cholesterol a kardiolipín.

V zahraničí, najmä v USA, sa používajú 4 netreponémové metódy, ktoré sa delia na dva typy: metódy umožňujúce vizuálne určiť výsledky reakcie (RPR a TRUST) a metódy na mikroskopické odčítanie výsledkov (USR a VDRL).

Netreponemálne diagnostické metódy zahŕňajú nepriame spojený imunosorbentový test s použitím kardiolipínu ako antigénu. U nás a v krajinách SNŠ je reakcia plazmy s inaktivované sérum (MR) a reakciu, s ktorou je kompliment spojený kardiolipín (RCC).

Všetky netreponemálne diagnostické metódy sú si navzájom veľmi podobné. Všetky majú nízke náklady, sú jednoduché a rýchle. Tieto typy testov nie sú vhodné na zistenie ochorenia v primárnom štádiu a na syfilis, ktorý sa vyskytuje tajne (latentná forma syfilisu). Protilátky, ktoré sa stanovia netreponémovým testom, sa objavia asi mesiac po infekcii treponémom. Vo väčšine prípadov u pacientov, ktorí sa liečili na primárne štádium syfilisu, sú netreponémové testy negatívne asi rok.

Treponemálne štúdie(testy) - TT sú oveľa drahšie, technika je veľmi zložitá a používajú sa na potvrdenie pozitívnych výsledkov, ktoré boli získané v netreponémových štúdiách.

Ako sme povedali vyššie treponémové metódy používa sa na potvrdenie prítomnosti bledého treponému v tele, ktorý sa zistil pomocou netreponémových testov. Vykonávajú sa aj vtedy, ak vykonané testy nepriniesli pozitívny výsledok, ale klinika naznačuje prítomnosť ochorenia. Po úplnom vyliečení syfilisu má viac ako 80% vyliečených pozitívnu reakciu pri vykonávaní treponémových testov ešte niekoľko rokov a pre niektorých aj doživotne. Na základe toho sa treponémové testy nepoužívajú na preventívne vyšetrenia u ľudí, ktorí absolvovali úplný priebeh liečby.

Vedecký výskum v oblasti imunológie a molekulárnej biológie neustále pokračuje a pomocou najnovších technológií sa objavuje stále viac nových testov na diagnostiku syfilisu, ktoré sú pevne na čele. Jeden z týchto testov, ktorý sa v praxi pevne udomácnil - enzýmová imunoanalýza (ELISA) a mnohé výskumné metódy sú vo vývoji.

To sérologický testovací komplex, ktorá sa vykonáva v Rusku, zahŕňa komplexné vykonávanie sérologických reakcií:

štandardné sérologické reakcie -

reakcia fixácie komplementu (Wassermannova reakcia),

reakcia s treponemálnym antigénom a reakcia s kardiolipínom;

skupinové treponémové reakcie -

imunofluorescenčná reakcia (RIF)

imunitná adhézna reakcia (RIP);

druhovo špecifické proteínové treponémové reakcie -

treponémová imobilizačná reakcia (RIT),

RIF - abs a jeho varianty (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS),

reakcia pasívnej hemaglucinácie treponémov (TPHA).

Ak sa sérologické testy použijú v kombinácii, umožní to identifikovať ochorenie v počiatočných štádiách ochorenia.

Wassermanova reakcia je metóda fixácie komplementu. Na uskutočnenie reakcie sa ako antigén používajú extrakty, ktoré sú vyrobené z bledých treponém (špecifické antigény) a kardiolipín je extrakt pripravený zo srdcového svalu býka (nešpecifické antigény). Čím viac bledých treponémov sa pozoruje v testovanom materiáli, tým väčší je stupeň ochorenia a vyhodnoťte stupeň s plusmi:

1) - negatívny; 2) + pochybné; 3) ++ slabo pozitívny; 4) +++ pozitívny; 5) ++++ silne pozitívne.

Wassermanova reakcia (reakcia fixácie komplementu) bez problémov sa uskutočňujú spolu so sedimentárnymi reakciami - Sachs - Vitebsky a Kahn. Imunologická povaha reakcií je vo všeobecnosti rovnaká ako pri Wassermanovej reakcii, ale tieto reakcie vyžadujú viac nasýtených antigénov, ktoré, keď reagujú so sérom, poskytujú väčšiu zrazeninu. Séronegatívny primárny syfilis je diagnostikovaný, ak sú štandardné sérologické testy negatívne. Detekcia syfilisu Wassermanova reakcia je účinná pri séropozitívnom sekundárnom syfilise, tu sú výsledky testu 100% správne. V terciárnom štádiu aktívneho syfilisu sú výsledky správne u viac ako polovice pacientov a v posledných štádiách syfilisu s poškodením vnútorných orgánov a systémov sú výsledky správne u polovice pacientov. O u pacientov s včasným vrodeným syfilisom dávajú sérologické testy takmer vždy pozitívny výsledok, a u pacientov s neskorým vrodeným syfilisom - v takmer 80% prípadov.

Princíp RSK spočíva v tom, že reaginy nachádzajúce sa v krvnom sére pacientov so syfilisom majú schopnosť vstupovať do zlúčenín s rôznymi antigénmi. Výsledné komplexy triedia komplement zavedený do reakcie. Na indikáciu komplexu reagin-antigén-komplement sa používa hemolytický systém (zmes baraních erytrocytov s hemolytickým sérom). V prítomnosti komplexu sa erytrocyty vyzrážajú. Čo je viditeľné voľným okom. Závažnosť hemolýzy indikuje lekár klávesmi: prudko pozitívne 4+, pozitívne 3+, slabo pozitívne 2+ alebo 1+ a negatívne. Okrem kvalitatívneho hodnotenia týchto reakcií existuje aj kvantitatívne, ktoré je dôležité pri diagnostike určitých štádií syfilisu a pri sledovaní účinnosti terapie.

Imunofluorescenčná reakcia (RIF) Je založená na detekcii protilátok, ktoré sú značené špeciálnym fluorescenčným roztokom za účelom detekcie protilátok asociovaných s antigénom vo fialových lúčoch kremennej lampy. Táto reakcia je vysoko citlivá a pomáha identifikovať ochorenie v primárnom štádiu séronegatívneho syfilisu. Je to aj tento test, ktorý pomáha identifikovať ochorenie u pacientov, u ktorých je ochorenie latentné alebo v neskorých štádiách. Existuje niekoľko typov takýchto reakcií a najviac sa cení RIF-200, pomocou ktorého môžete odhaliť latentný syfilis a rozpoznať nešpecifické výsledky CSR. Ale napriek vysokej miere RIF-200 sa diagnóza stanoví po vykonaní všetkých klinických testov. RIF nie je vhodný na sledovanie pacientov po kompletnej liečbe, keďže v štádiu liečby je skôr pomaly negatívny.

Imunitná adhézna reakcia (RIP). Táto reakcia je založená na adhézii treponémov, ktoré sú senzibilizované sérom, na erytrocyty a ich precipitáciu. Výsledky sa vyhodnocujú podľa nasledujúcej tabuľky:

Negatívne – 0 – 20 %

Pochybné-21-30%;

Slabo pozitívne - 31-50%;

Pozitívny-51-100%.

Vo všetkých ohľadoch je RIP veľmi podobný RIF a RIT. Táto reakcia sa vykonáva vo viacerých prípadoch, ak sa syfilis nepotvrdí na základe klinických prejavov, anamnézy, laboratórnych testov, na kontrolu ochorenia po získaní potrebnej liečby a na potvrdenie výsledkov CSR.

Treponema pallidum imobilizačná reakcia (RIT) Akonáhle sú v prostredí, kde sú imobilizíny testovaného séra a aktívny komplement, bledé treponémy strácajú svoju pohyblivosť. To je základ tejto reakcie. RIT je veľmi špecifický a používa sa na detekciu latentného syfilisu, na diagnostiku tehotných žien, u ktorých je podozrenie na syfilis, a mnohých ďalších prípadov, v ktorých sú štandardné sérologické testy málo špecifické. Veľkou nevýhodou tejto reakcie je, že je veľmi drahá a je to veľmi komplikovaný proces na uskutočnenie. Výsledky sa odčítajú podľa percentuálnych údajov imobilizácie bledých treponém:

Negatívne - až 20%; -pochybné -21-30%; -slabo pozitívne -31-50%; -pozitívne -51-100%.

Vzhľadom na to, že imobilizíny sa objavujú v krvi neskôr ako iné protilátky, reakcia sa stáva pozitívnou o niečo neskôr ako pri iných reakciách. V počiatočnom štádiu infekcie sa spravidla pozoruje negatívna alebo slabo pozitívna reakcia. V sekundárnom štádiu syfilisu, hoci výskyt imobilizínov v krvnom sére pacienta sa pozoruje až do 60 %, je reakcia pozitívna u takmer polovice subjektov. Pri recidíve sekundárneho štádia syfilisu je RIT pozitívna u takmer 90 % pacientov. V terciárnom štádiu vývoja syfilisu s poškodením vnútorných orgánov vrátane nervového systému, keď Wassermanova reakcia dáva negatívne výsledky, je imobilizačná reakcia bledého treponému pozitívna u takmer 100% pacientov. V počiatočnom štádiu vrodeného syfilisu má reakcia pozitívny výsledok takmer u všetkých pacientov a v neskorom štádiu vrodeného syfilisu - takmer u 100% pacientov. Séropozitívny latentný syfilis je potvrdený až po RIT, ktorý sa vykonáva po získaní pozitívnych výsledkov počas iných sérologických testov. RIT sa nepoužíva na kontrolu ochorenia u pacientov ktorí dostali potrebnú liečbu.

Imunofluorescenčný test absorbancie Treponema pallidum (FTA-ABS).Ak sa reakcia uskutoční u pacienta, ktorý má syfilis a nebol liečený, potom táto reakcia vždy dáva pozitívny výsledok. Existuje tiež vysoká pravdepodobnosť zistenia infekcie pomocou FTA-ABS na samom začiatku ochorenia.. Reakcia má veľkú citlivosť a špecifickosť. Na diagnostiku latentného syfilisu a v prípadoch, keď už bolo vykonaných niekoľko testov a ukázali negatívny výsledok, ale klinika hovorí o infekcii bledým treponémom, sa v takýchto prípadoch často diagnostikuje na základe výsledkov FTA-ABS. . Doslova týždeň po vstupe bledého treponému do tela sa začnú produkovať špecifické protilátky IgM, ktoré sa nakoniec prestanú objavovať a po 2 rokoch sa už nezistia. Aby sme pochopili, či je navrhovaná liečba účinná, vykonávajú sa špeciálne testy, ktoré určujú špecifickosť týchto protilátok. Dnes existuje niekoľko takýchto testov, ale ich vykonanie je príliš drahé, takže tieto testy sa u väčšiny pacientov nevykonávajú.

Hemaglutinačná reakcia, ktorá stanovuje špecifické protilátky proti bledému treponému (mikro-TPHA). Pre túto reakciu slúžia treponémy ako antigén, takže táto reakcia je veľmi špecifická a vo väčšine prípadov dáva pravdivé výsledky.

Enzýmová imunoanalýza (ELISA) jeden z najšpecifickejších pre diagnostiku syfilisu. Dnes sa najčastejšie používa nepriamy variant ELISA. Výhody tejto výskumnej metódy sú zrejmé: nie príliš vysoké náklady, jednoduchosť implementácie, vysoká presnosť výsledku, pomocou tejto analýzy je možné odhaliť syfilis v počiatočnom štádiu, rýchle výsledky.

V jadre imunoblotovacia metóda leží enzýmová imunoanalýza, ktorá je kombinovaná s elektroforézou. Je to jeden z najšpecifickejších testov a s jeho pomocou sa potvrdí infekcia syfilisom.

polymerická reťazová reakcia (špecifická výskumná metóda) vykonaná na stanovenie diagnózy v latentnom priebehu infekcie syfilisom. Pri vykonávaní PCR sa patogén nachádza v testovanom materiáli, dokonca aj v počiatočnom štádiu ochorenia. Detegovaný genetický materiál je rozdelený DNA a tak je veľmi ľahké odhaliť patogén. Pri neurosyfilise, keď je veľmi ťažké odhaliť infekciu pri vykonávaní iných testov z dôvodu veľmi nízkej citlivosti, pri vrodenom syfilise, v primárnom štádiu séronegatívneho syfilisu a na stanovenie diagnózy u ľudí infikovaných HIV, je PCR nevyhnutná. Štúdium cerebrospinálnej tekutiny so syfilisom sa vykonáva, ak existujú klinické lézie nervového systému v počiatočnom štádiu ochorenia, s latentnou formou a vždy pred začiatkom liečby. Táto analýza je tiež predpísaná pre pacientov s neurosyfilisom v neskorých štádiách syfilisu a s latentnou formou. Klinické laboratórium vykonáva štúdiu cytózy, obsahu bielkovín, reakcií Pandey a Nonne-Apelt. V sérologických laboratóriách sa vykonáva Wassermanova reakcia, Langeho reakcia, RIF, RIFyu, RIFts, RIT.

Stránka poskytuje referenčné informácie len na informačné účely. Diagnóza a liečba chorôb by sa mala vykonávať pod dohľadom špecialistu. Všetky lieky majú kontraindikácie. Vyžaduje sa odborná rada!

Kontaktovanie venereológa - prečo je to potrebné?

Anamnéza- zhromažďovanie informácií potrebných na identifikáciu diagnózy: sťažnosti pacientov, informácie o niektorých aspektoch sexuálneho života a kontaktoch s podozrivými pohlavne prenosné choroby osôb. Prekonané pohlavné choroby, informácie o výsledkoch ich liečby. Všetky tieto informácie umožňujú ošetrujúcemu lekárovi sústrediť sa na najpravdepodobnejšie ochorenia, ktoré spôsobili, že pacient vyhľadal špecializovanú pomoc.

Nasledovaný klinické vyšetrenie. Sliznice a koža pohlavných orgánov, oblasť konečníka a ústna sliznica sú podrobené najdôkladnejšiemu vyšetreniu. Zvýšená pozornosť sa venuje palpácii vonkajších skupín lymfatických uzlín, palpácii identifikovaných infekčných nekrotických ložísk. V tomto štádiu je často možné diagnostikovať syfilis s pomerne vysokou pravdepodobnosťou.

Na stanovenie konečnej diagnózy, ako aj na sledovanie dynamiky procesu počas prebiehajúcej liečby je však potrebné vykonať laboratórne testy.

Laboratórne potvrdenie syfilisu - čo zahŕňa a ako sa to robí?

2. Priama fluorescenčná reakcia. Tejto diagnostickej metóde predchádza spracovanie biomateriálu špeciálnym fluorescenčným sérom, ktoré vedie k prichyteniu špecifických imunitných komplexov na povrch bledého treponému. V dôsledku tejto reakcie pri mikroskopovaní spracovaného biomateriálu vo fluorescenčnom mikroskope vyzerá bledý treponém žiarivo a elegantne.

3. PCR ( polymerická reťazová reakcia). Táto metóda umožňuje identifikovať DNA infekčného agens, čím je jeho prítomnosť v tele pacienta jasná.

Ako sa zisťujú imunologické príznaky syfilisu a prečo by sa mali zisťovať?
Celá skupina štúdií imunologických parametrov na účely diagnostiky infekčných ochorení je tzv sérológia. V súčasnosti existuje veľa sérologických diagnostických metód, no všetky spája fakt, že biomateriálom v diagnostike je krv pacienta. S ohľadom na diagnostiku syfilisu možno všetky sérologické vyšetrenia rozdeliť na treponémové – zisťujúce protilátky proti štruktúrnym prvkom bledého treponému a netreponémové – odhaľujúce imunologické zmeny spojené s dôsledkami bakteriálnej aktivity.

Netreponemálna sérológia
1. Precipitačná mikroreakcia (VDRL). Táto štúdia zisťuje v krvi pacienta protilátky produkované imunitným systémom proti bunkám poškodeným bledým treponémom. Tento test má vysokú spoľahlivosť, ale nízku špecifickosť. Faktom je, že detekovateľné protilátky môžu byť prítomné v krvi pri mnohých ochoreniach a patologických stavoch. Preto sa tento test používa len ako skríning na ochorenie, odhaľujúce podozrenie na ochorenie. Táto metóda má však neoceniteľnú výhodu v diagnostike účinnosti liečby. Ak je pacient vyliečený, precipitačná mikroreakcia s kardiolipínovým antigénom sa stáva negatívnou, na rozdiel od iných sérologických typov výskumu, ktorý môže dlhodobo poskytnúť pozitívny výsledok.

2. Wassermanova reakcia. Táto štúdia je spojená s reakciou fixácie komplementu - jedným z mechanizmov implementácie imunologickej odpovede.
Test sa hodnotí kladne ( nie v krížoch, ako mnohí veria!). A reakcia je negatívna ako výsledok prieskumu uvedené mínus), pochybné ( ako výsledok prieskumu je uvedené 1 plus +), slabo pozitívny ( ako výsledok vyšetrenia sú uvedené 2 plusy ++), pozitívna reakcia ( ako výsledok vyšetrenia sú uvedené 3 plusy +++), prudko pozitívna reakcia ( ako výsledok vyšetrenia sú uvedené 4 plusy ++++).

Treponemálna sérológia
1. Imunofluorescenčná reakcia (RIF). Tento typ štúdie zisťuje protilátky produkované imunitným systémom infikovanej osoby. Na tento účel sa uskutočňuje interakcia krvného séra pacienta a špecifického prípravku obsahujúceho protilátky. Po zmiešaní krvnej plazmy pacienta a činidla so špecifickými protilátkami označenými špeciálnou fluorescenčnou látkou sa tieto naviažu. Štúdia sa uskutočňuje pomocou špeciálneho fluorescenčného mikroskopu.

2. Enzýmová imunoanalýza (ELISA). Táto analýza si zaslúži podrobnejšie informácie. Pretože je to hlavný pri identifikácii väčšiny infekčných chorôb. Metóda je založená na selektívnej vysoko špecifickej reakcii antigén-protilátka. Jednou z vlastností tejto analýzy je, že ju možno použiť na detekciu protilátok rôznych tried ( IgA IgM IgG ). Dôležitá je aj schopnosť tejto analýzy určiť množstvo detekovaných protilátok. Výsledkom je, že stanovenie typu protilátok a ich kvantitatívnej zložky nám umožňuje vyvodiť množstvo záverov o dĺžke trvania ochorenia, dynamike procesu, aktivite patogénu a imunitnom systéme pacienta. V dôsledku toho sa táto analýza ukázala ako nevyhnutná pri diagnostike infekčných ochorení, ako aj pri sledovaní dynamiky ochorenia na pozadí prebiehajúcej liečby.

3. Reakcia pasívnej hemaglutinácie (RPHA). Táto reakcia je založená na imunologicky vyvolanej aglutinácii erytrocytov. Mechanizmus tejto reakcie spočíva v tom, že sú predbežne pripravené erytrocyty, na ktorých povrchu sú fixované proteínové zložky bledého treponému. Preto po zmiešaní s krvnou plazmou obsahujúcou protilátky proti treponému sa erytrocyty zlepia – krv sa zmení z červenej na granulovanú. Pozitívna hemaglutinačná reakcia nastáva 4 týždne po infekcii. Po úspešnej liečbe syfilisu môže táto reakcia zostať pozitívna po celý život.

Z uvedeného je zrejmé, že problematika diagnostiky, sledovania účinnosti liečby a vyliečenia je pomerne komplikovaná a časovo náročná práca. A je nemožné, aby pacient, ktorý nemá medicínske vzdelanie, pochopil ciele a výsledky štúdie. Pokúsime sa však prístupnou formou predstaviť dynamiku imunologických zmien v rôznych štádiách syfilisu a laboratórne ukazovatele, ktoré tieto zmeny odhalia.

Takže - trochu teórie. Po infekcii sa imunitné bunky najskôr stretnú s treponema pallidum. Imunokompetentné bunky identifikujú ako cudzí mikroorganizmus a začnú aktívne vytvárať imunitnú odpoveď. Protilátky špecifické pre treponema pallidum IgM, sa nachádzajú v krvi pacienta 7 dní po infekcii, protilátky IgG syntetizované neskôr - po 4 týždňoch. Tieto 2 triedy protilátok sa líšia v štruktúre, ale pre diagnostiku je dôležité, že IgM syntetizované v skorých štádiách infekcie ( Čo to znamená pre nedávnu infekciu?) alebo v prítomnosti vysokej aktivity infekcie. Detekcia IgG iba naznačuje vytvorenie stabilnej imunity voči tejto infekcii, iba séria analýz titra protilátok v dynamike nám umožňuje posúdiť vyliečenie choroby alebo aktivitu infekcie. Antilipidy ( nešpecifické) imunologické komplexy sa aktívne syntetizujú 4-5 týždňov po infekcii.
Dôležitá je skutočnosť, že v období klinických prejavov syfilisu v krvi sa zisťujú protilátky špecifické pre bledý treponém napr. IgM a trieda IgG (celkové protilátky). Dôležitým parametrom v procese liečby je zmena kvantitatívnych parametrov protilátok. Správne zvolená liečba prispieva k prudkému poklesu koncentrácie IgM, na pozadí stabilnej úrovne IgG- tieto indikátory naznačujú vytvorenú stabilnú imunitu voči bledému treponému na pozadí zníženia jeho infekčnej aktivity. Je potrebné venovať pozornosť skutočnosti, že špecifické protilátky proti treponému môžu zostať v ľudskej krvi mnoho rokov, čo v niektorých typoch štúdií poskytuje pozitívne výsledky.

Ako interpretovať výsledky sérologických štúdií?

Reaginove testy sa používajú na hromadný skríning pacientov na syfilis. Zvyčajne sa vykonávajú v rámci preventívnych prehliadok. Takéto testy sú dostupné v každom zdravotníckom zariadení a vykonávajú sa rýchlo. Odpoveď je zvyčajne pripravená po 30-40 minútach.

Pozitívny výsledok počas reaginových reakcií nie je kritériom pre stanovenie diagnózy. Sú potrebné ďalšie druhovo špecifické štúdie.

Najbežnejšou skríningovou metódou je Wassermanova reakcia. Využíva kardiolipín a treponemálne antigény. Ak v krvnom sére nie sú žiadne reaginy, dôjde k hemolýze baraních erytrocytov, ktoré sa pridávajú ako indikátor.

V prítomnosti reaginov sa vyzrážajú celé erytrocyty, v tomto prípade sa reakcia považuje za pozitívnu.

Reaginic v nasledujúcich prípadoch:

• iné choroby, ktorých pôvodcovia majú podobnú antigénnu štruktúru ako pallidum spirochéta
• tehotenstva
• onkologické ochorenia
• užívanie salicylátov
• infarkt myokardu
• technické chyby v analýze

S pozitívnym výsledkom reaginickej reakcie sa vykonávajú špecifické sérologické testy. Predpísané sú aj v prípade pochybností o negatívnom výsledku.

Treponemálne antigény sa používajú v takých testoch, ako je RIF, RIT, ELISA, TPHA, hemadsorpčná reakcia v pevnej fáze. Tieto reakcie sú založené na tvorbe komplexov antigén-protilátka a líšia sa spôsobom ich stanovenia. Najčastejšie používanou reakciou je imunofluorescencia.

Liečivo je ošetrené luminiscenčným sérom, ktoré vám umožňuje určiť imunitné komplexy pod fluorescenčným mikroskopom.

Jedným z najcitlivejších sérologických testov na diagnostiku syfilisu je TPHA. Metóda má vysokú presnosť. Často sa používa na overenie diagnózy počas tehotenstva, keď iné testy môžu poskytnúť falošne pozitívny výsledok.

Vlastnosti sérodiagnostiky

Pre sérologická diagnostika syfilisu v jeho rôznych obdobiach odobrať krv zo žily. Analýza sa odporúča vykonať nalačno, čím sa zníži počet falošne pozitívnych výsledkov. Rúrka musí byť sterilná. Pri vykonávaní expresných testov sa v niektorých prípadoch odoberá krv z prsta.

V prípade podozrenia sa odoberie mozgovomiechový mok na sérodiagnostiku. Na jej analýzu sa používajú rovnaké metódy ako pri štúdiu krvi.

Na diagnostiku syfilisu absolvujte kompletné vyšetrenie v našej ambulancii.