Diagnostyka serologiczna zakażenia syfilitycznego. Nowoczesne metody laboratoryjne i algorytmy diagnostyki kiły. Jak interpretować testy na kiłę

Taksonomia Borrelia, Leptospira i Treponema oraz nazwy chorób przez nie wywoływanych.

Rodzina: Spirochaetaceae

Rodzaj: Borrelia

Gatunek: B. recurrentis jest czynnikiem wywołującym epidemiczną gorączkę nawrotową.

Rodzaj: Treponema

Gatunek: T. pallidum - czynnik sprawczy kiły

Rodzaj: Leptospira

Gatunek: L. Icterohaemorrhagiae – czynnik sprawczy leptospirozy

Diagnostyka mikroskopowa kiły.

Mikroskopia ciemnego pola: przed badaniem pobiera się płyn tkankowy z dna owrzodzenia lub punktowego węzła chłonnego. Przygotowuje się preparat rozdrobnionej kropli: kroplę materiału badawczego nanosi się na środek szkiełka, kroplę przykrywa się szkiełkiem nakrywkowym, tak aby nie było pęcherzyków powietrza. Wynik pozytywny: mikroskopia ujawnia treponemy z jednolitymi 8-12 dużymi lokami. Charakteryzują się płynnymi ruchami rotacyjno-translacyjnymi, wahadłowymi i zgięciowymi.Po zabarwieniu według Romanovsky-Giemsa: czynnik sprawczy kiły jest pomalowany na jasnoróżowy kolor, inny treponema - na czerwono-fioletowy kolor.

Reakcje stosowane w serodiagnostyce kiły. Ogólna charakterystyka każdego z nich.

RSK(reakcja Wassermanna): Składniki: 1 system – surowica pacjenta, diagnostyka, dopełniacz, ICN; System 2 – surowica hemolityczna i zawiesina erytrocytów owiec. Przygotować 1 system, inkubować w 37°C przez 1 h. Dodać drugi system, inkubować w 37°C przez 1 h. Wynik pozytywny – brak hemolizy.

RPG: Składniki: ICN, surowica pacjenta, diagnostyka erytrocytów. Przygotowuje się rozcieńczenia surowicy, dodaje się środek diagnostyczny i umieszcza w termostacie na 24 godziny w temperaturze 37°C. Podłoga. wynik: parasol.

ELISA: Składniki: surowica pacjenta, substancja diagnostyczna, koniugat, substrat chromogenny. Diagnostykę wiąże się z plastikową studzienką płytki i dodaje rozcieńczoną surowicę, koniugat i substrat. Podłoga. skutek: zmiana koloru podłoża.

Pośredni RIF: AG - Treponema pallidum (szczep Nicholsa) nanosi się na szkiełko. Rozmazy suszy się na powietrzu i utrwala w acetonie na 5 minut. Surowicę pacjenta zubożono zawiesiną niepatogennych krętków szczepu Reiter lub rozcieńczono w stosunku 1:200, a następnie naniesiono na przygotowane preparaty. Utrzymać w wilgotnej komorze w temperaturze 35°C przez 30 minut (pierwsza faza). Rozmazy przemywa się przez 10 minut w ICN i suszy. Następnie na preparat nanosi się kroplę fluorescencyjnej surowicy przeciw ludzkiej globulinie i inkubuje w wilgotnej komorze w temperaturze pokojowej przez 30 minut (faza 2). Rozmazy przemywa się chemicznymi środkami chemicznymi i suszy. Oglądane pod mikroskopem fluorescencyjnym. Pozytywna reakcja: zielona poświata.

Reakcja flokulacji na szkle: Osocze krwi lub nieogrzaną surowicę miesza się przez kilka minut na szklanym szkiełku z nieswoistym antygenem lipidowym. Wynik pozytywny: przy małym powiększeniu widoczne są powiększone cząsteczki antygenu (kłaczki).

Serodiagnostyka kiły za pomocą RPGA.

Składniki: ICN, surowica pacjenta, diagnostyka erytrocytów. Przygotowuje się rozcieńczenia surowicy, dodaje się środek diagnostyczny i umieszcza w termostacie na 24 godziny w temperaturze 37°C. Podłoga. wynik: parasol.

Serodiagnostyka kiły za pomocą testu ELISA.

Składniki: surowica pacjenta, substancja diagnostyczna, koniugat, substrat chromogenny. Diagnostykę wiąże się z plastikową studzienką płytki i dodaje rozcieńczoną surowicę, koniugat i substrat. Podłoga. skutek: zmiana koloru podłoża.

Serodiagnostyka kiły za pomocą RSC.

Reakcja Wassermana: można użyć surowicy krwi pacjenta i płynu mózgowo-rdzeniowego (na etapie kiły układu nerwowego). Jako środek diagnostyczny stosuje się antygen krętkowy lub kardiolipinowy. Elementy składowe: 1 system – surowica pacjenta, diagnostyka, dopełniacz, ICN; System 2 – surowica hemolityczna i zawiesina erytrocytów owiec. Przygotować 1 system, inkubować w 37°C przez 1 h. Dodać drugi system, inkubować w 37°C przez 1 h. Wynik pozytywny – brak hemolizy.

Metody diagnostyki mikrobiologicznej leptospirozy.

Metoda bakterioskopowa: przygotować preparat z rozdrobnionej kropli, zbadać go w mikroskopie z ciemnym polem: ruchome cienkie nitki z zagięciami na końcach (loki wtórne) - w formie zszywki lub litery S.

Metoda bakteriologiczna: materiał – krew, mocz, płyn mózgowo-rdzeniowy. Materiał inokuluje się (3-5 probówek) w pożywce wodno-surowicowej, pożywce Fletchera i pożywce Kartofa. Inkubować do 30 dni w temperaturze 28-30°C w atmosferze CO2. W celu wykrycia wzrostu Leptospiry po 10 dniach od wysiewu pobiera się materiał z probówki, przygotowuje się preparat rozdrobnionego potasu i bada go pod mikroskopem w ciemnym polu widzenia. Z probówki, w której wykryto wzrost Leptospira, przenieść do 3 probówek ze świeżą pożywką, inkubować przez 7-10 dni, temperatura jest taka sama. W celu różnicowania przeprowadza się próbę wodorowęglanową, określa aktywność hemolityczną i aktywność fosfolipazy. Identyfikowany na podstawie struktury antygenowej przy użyciu aglutynujących surowic.

Badania biologiczne: Świnkom morskim wstrzykuje się dootrzewnowo 1 g materiału testowego i obserwuje przez miesiąc, odnotowując temperaturę i masę ciała, pojawienie się żółtaczki i krwotoków, a także śmierć zwierzęcia.

Badanie serologiczne: AT w surowicy pojawia się po 2 tygodniach. Stosuje się reakcje mikroaglutynacji i lizy Leptospira. Surowicę pacjenta rozcieńcza się dwukrotnie w stosunku 1:100 do 1:1600. Do serii probówek dodaje się 0,2 ml rozcieńczonej surowicy i taką samą ilość żywych kultur szczepów Leptospira. Inkubować przez 1 godzinę w temperaturze 37°C. Z zawartości każdej probówki przygotowuje się preparat w postaci rozdrobnionej kropli, który bada się pod mikroskopem. AT w surowicy pierwszych rozcieńczeń powoduje lizę - rozpuszczenie lub ziarnisty obrzęk Leptospira. W kolejnych rozcieńczeniach - aglutynacja - aglomeraty w postaci pająków. Wartość diagnostyczną ma reakcja dodatnia przy rozcieńczeniu 1:400 lub wyższym.

1. Potekaev N.N., Frigo N.V., Almazova A.A., Lebedeva G.A. Epidemiologia kiły we współczesnych warunkach. Kliniczny dermatologia I wenerologia. 2015;1:22-34.
2. Larsen SA, Steiner BM, Rudolph AH. Diagnostyka laboratoryjna i interpretacja testów na kiłę. Clin Microbiol Rev 1995 styczeń; 1-21.
3. Coles AC. Spirochaeta blada. Metody badania i wykrywania, zwłaszcza za pomocą oświetlenia ciemnego podłoża. Br Med 1909;1:1117-1120.
4. Kellogg, DSJr, Mothershed SM. Immunofluorescencyjne wykrywanie Treponema blada:recenzja. JAMA 1969;107:938-941.
5. Mullis KB. Specyficzna synteza DNA in vitro poprzez reakcję łańcuchową katalizowaną polimerazą. Met Enzymol. 1987;155:335.
6. Centurion-Lara A. Wykrywanie Treponema pallidum za pomocą czułej reakcji PCR z odwrotną transkryptazą. J Clin Microbiol. 1997;35;6:1348-1352.
7. Wassermann A, Neisser A, Brück C. Eine serodiagnostische Reaktion bei Syphilis. Dtsch Med Wochenschr. 1906;32:745-746.
8. Pangborn MC. Kardiolipina i jej zastosowanie w chemicznie oczyszczonym antygenie do serodiagnostyki kiły. Proc N Y State Assoc Laboratorium Zdrowia Publicznego. 1946;26(1):26-29.
9. Pangborn MC. Badanie składu kardiolipiny. Fed Proc. 1946;5(1 pkt 2):149.
10. Dmitriev G.A., Bragina E.E. Nowoczesne metody diagnostyki laboratoryjnej kiły. Część I Dziennik Dermatologii. 1996;2:29-33.
11. Dmitriev G.A., Bragina E.E. Nowoczesne metody diagnostyki laboratoryjnej kiły. Część druga. Dziennik Dermatologii. 1996;3:33-38.
12. Niespecyficzne pozytywne wyniki testów serologicznych na kiłę. Ilościowe modyfikacje współczesnych reakcji serologicznych. Wytyczne. M. 1990.
13. Zarządzenie Ministra Zdrowia nr 87 Federacji Rosyjskiej z dnia 26 marca 2001 r. „W sprawie poprawy diagnostyki serologicznej kiły”.
14. Rosyjskie Towarzystwo Dermatowenerologów. Federalne wytyczne kliniczne dotyczące postępowania z pacjentami chorymi na kiłę. M. 2013.
15. Lyakhov V.F., Borisenko K.K., Potekaev N.S. i wsp. Dynamika immunoglobulinemii specyficznej dla krętków we wczesnych postaciach kiły. Dziennik Dermatologii. 1990;8:38-42.
16. Kiseleva G.A., Tkachev V.K., Bednova V.N. i wsp. Badanie porównawcze czułości i swoistości trzech systemów testów immunoenzymatycznych przeznaczonych do wykrywania immunoglobulin klasy M czynnika sprawczego kiły. Dziennik Dermatologii. 2000;4:6-10.
17. Ermatova F.A. Oznaczanie swoistych immunoglobulin klasy M do wczesnej diagnostyki kiły (badanie kliniczne i laboratoryjne): dis. ...cad. Miód. Nauka. M. 2014.
18. Mardanly S.G., Arsenyeva V.A., Aniskova I.N., Zhigalenko A.R. Krajowy system testowy „Line-Blot Syphilis-IgM” do oznaczania przeciwciał IgM przeciwko Treponema pallidum metodą liniowego immunoblottingu Dermatologia kliniczna i wenerologia. 2013;5:35-38.
19. Gusiewa S.N. Zastosowanie testu IgM-RIFAbs w badaniu kobiet ciężarnych pod kątem aktywności zakażenia syfilitycznego. Rosyjski dziennik chorób skórnych i wenerycznych. 2004;6:60-63.
20. Ovchinnikov N.M., Bednova V.N., Delectorsky V.V. Diagnostyka laboratoryjna chorób przenoszonych drogą płciową. M. 1987.
21. Lee K, Park H, Roh EY, Shin S, Park KU, Park MH, Piosenka EY. Charakterystyka surowic z niezgodnymi wynikami badania przesiewowego w kierunku kiły z odwróconą sekwencją. Biomed Res Int. 2013;2013:269-347.
22. Binnicker MJ. Jakiego algorytmu należy użyć do badania przesiewowego w kierunku kiły? Curr Opin Infect Dis. 2012 luty;25(1):79-85.
23. Castro A, Jost H, Cox D, Fakile Y, Kikkert S, Tun Y, Zaidi A, Park M. Porównanie analitycznego poziomu zgodności dziewięciu testów krętkowych na kiłę i możliwe implikacje dla algorytmu przesiewowego. Otwarte BMJ. 2013 września 19;3(9).
24. Park IU, Chow JM, Bolan G, Stanley M, Shieh J, Schapiro JM. Badania przesiewowe w kierunku kiły za pomocą testu immunologicznego krętkowego: analiza niezgodnych wyników serologicznych i implikacje dla postępowania klinicznego. J Infect Dis. 2011 listopad;204(9):1297-1304.

Rosyjski Narodowy Uniwersytet Medyczny im. N.I. Pirogova

Katedra Dermatowenerologii, Wydział Pediatrii

Raport na temat: Laboratoryjne metody diagnozowania kiły

Ukończyli: Student 440 w grupach

Wydział Pediatrii

Seranow Igor Anatoliewicz

Badania bez krętków

Badania krętkowe

Kompleks reakcji serologicznych

Reakcja Wassermana

Reakcja immunofluorescencyjna

Reakcja adhezji immunologicznej

Reakcja unieruchomienia Treponema pallidum

Reakcja immunofluorescencyjna poprzez adsorpcję Treponema pallidum

Reakcja hemaglutynacji

Połączony test immunoabsorpcyjny

Reakcja łańcuchowa polimerazy

Wszystkie stosowane obecnie metody badań serologicznych są warunkowo podzielone na dwa typy: niekrętkowy, kwalifikacyjne (NTT)- i krętkowy, które potwierdzają obecność patogenu (TT) Kiła jest chorobą bardzo złożoną, obraz kliniczny jest bardzo niejasny i nie zawsze daje się ujawnić, dlatego w celu postawienia prawidłowego rozpoznania stosuje się jednocześnie kilka testów serologicznych. Wizualne potwierdzenie obecności Treponema pallidum w pobranej próbce (za pomocą mikroskopu) pozwala na natychmiastową diagnozę, a inne badania są rzadko wykonywane.

Badania bez krętków(badania) - NTT to tzw. badania przesiewowe, nie są bardzo drogie, a za ich pomocą można przebadać dość dużą liczbę pacjentów, a wyniki wielu badań są gotowe bardzo szybko. Jednak w przypadku fałszywego przebiegu choroby, przy niskiej czułości, przeprowadzenie takich badań jest niepraktyczne, nie będzie możliwe uzyskanie 100% wyniku.

Podczas dyrygowania niekrętkowy badania w badanym materiale, wykrywane są przeciwciała, z którymi reaguje kardiolipina – antygen lecytyny. Jednym z pierwszych testów była metoda oparta na reakcji immunologicznej Bordeta-Giangu, w której antygenem był ekstrakt z wątroby noworodka zmarłego na kiłę. Dziś przy przeprowadzaniu takich testów antygen jest lecytyna, cholesterol i kardiolipina.

Za granicą, w szczególności w USA, stosuje się 4 metody bezkrętkowe, które dzielą się na dwa rodzaje: metody pozwalające wizualnie określić wyniki reakcji (RPR i TRUST) oraz metody mikroskopowego odczytu wyników (USR i VDRL).

Metody diagnostyczne inne niż krętkowe obejmują pośrednie połączony test immunoabsorpcyjny stosując kardiolipinę jako antygen. W naszym kraju i krajach WNP testy inne niż krętkowe są reakcją osocza z inaktywowana surowica (MR) oraz reakcja, z którą wiąże się komplement kardiolipina (CLP).

Wszystkie metody diagnostyczne inne niż krętkowe są do siebie bardzo podobne. Wszystkie charakteryzują się niskim kosztem oraz są łatwe i szybkie w wykonaniu. Tego typu testy nie nadają się do wykrywania choroby w stadium pierwotnym oraz do wykrywania kiły występującej w ukryciu (kiła ukryta). Przeciwciała określone w teście bez krętka pojawiają się około miesiąca po zakażeniu krętkiem. W większości przypadków u pacjentów leczonych z powodu kiły pierwotnej, badania inne niż krętkowe dają wynik negatywny przez około rok.

Badania krętkowe(testy) - TT są znacznie droższe, ich technika jest bardzo złożona i służą do potwierdzenia pozytywnych wyników, jakie uzyskano w badaniach innych niż krętkowe.

Jak powiedzieliśmy powyżej metody krętkowe służy do potwierdzenia obecności Treponema pallidum w organizmie, którą wykryto za pomocą testów innych niż krętek. Przeprowadza się je także wtedy, gdy przeprowadzone badania nie dają wyniku pozytywnego, ale klinika podejrzewa obecność choroby. Po całkowitym wyleczeniu kiły ponad 80% wyleczonych ma pozytywną reakcję podczas wykonywania testów krętkowych przez kilka kolejnych lat, a u niektórych - do końca życia. Na tej podstawie testów krętkowych nie stosuje się do badań profilaktycznych u osób, które ukończyły pełny cykl leczenia.

Badania naukowe z zakresu immunologii i biologii molekularnej trwają nieustannie i przy pomocy najnowocześniejszych technologii pojawia się coraz więcej nowych testów do diagnozowania kiły, które zdecydowanie zajmują wiodącą pozycję. Jednym z tych testów, który ugruntował się w praktyce, jest test immunoenzymatyczny (ELISA), a wiele metod badawczych jest w fazie rozwoju.

To kompleks badań serologicznych przeprowadzana w Rosji obejmuje złożone reakcje serologiczne:

standardowe reakcje serologiczne –

reakcja wiązania dopełniacza (reakcja Wassermanna),

reakcja z antygenem krętkowym i reakcja z kardiolipiną;

grupowe reakcje krętkowe -

reakcja immunofluorescencyjna (RIF)

reakcja adhezji immunologicznej (IAR);

specyficzne dla gatunku reakcje krętkowe białek –

Reakcja unieruchomienia krętka (TRIT),

RIF - abs i jego odmiany (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS),

bierna reakcja hemaglucynacji krętkowej (TPHA).

Jeśli reakcje serologiczne zostaną zastosowane w połączeniu, umożliwi to identyfikację choroby we wczesnych stadiach choroby.

Reakcja Wassermanna jest metodą wiązania dopełniacza. Do przeprowadzenia reakcji jako antygeny stosuje się ekstrakty z Treponema pallidum (swoiste antygeny) i kardiolipinę, ekstrakt przygotowany z bydlęcego mięśnia sercowego (nieswoiste antygeny). Im jaśniejszy krętek obserwuje się w badanym materiale, tym większy stopień choroby i stopień ocenia się plusami:

1) - negatywny; 2) + wątpliwe; 3) ++ słabo pozytywny; 4) +++ dodatni; 5) ++++ ostro pozytywnie.

Reakcja Wassermana (reakcja wiązania dopełniacza) koniecznie przeprowadza się je razem z reakcjami osadowymi - Sachsa - Witebska i Kahna. Immunologiczny charakter reakcji jest na ogół taki sam jak reakcji Wassermana, ale reakcje te wymagają bardziej nasyconych antygenów, które w reakcji z odczynnikami surowicy dają większy osad. Kiłę pierwotną seronegatywną rozpoznaje się, gdy standardowe badania serologiczne dają wynik negatywny. Wykrywanie kiły Reakcja Wassermana jest skuteczna w przypadku seropozytywnej kiły wtórnej, tutaj wyniki testu są w 100% prawidłowe. W trzecim stadium kiły aktywnej wyniki są prawidłowe u ponad połowy pacjentów, a w końcowych stadiach kiły, gdy zajęte są narządy i układy wewnętrzne, wyniki są prawidłowe u połowy pacjentów. U u pacjentów z kiłą wrodzoną wczesną testy serologiczne prawie zawsze dają wynik pozytywny, a u pacjentów z kiłą wrodzoną późną - w prawie 80% przypadków.

Zasada RSC jest taka, że ​​odczynniki znajdujące się w surowicy krwi pacjentów chorych na kiłę mają właściwość łączenia się z różnymi antygenami. Powstałe kompleksy sortują dopełniacz wprowadzony do reakcji. Do oznaczenia kompleksu reagina–antygen–dopełniacz wykorzystuje się układ hemolityczny (mieszanina erytrocytów owczych z surowicą hemolityczną). W obecności kompleksu wytrącają się czerwone krwinki. Co widać gołym okiem. Stopień nasilenia hemolizy lekarz określa za pomocą następujących kluczy: silnie dodatni 4+, dodatni 3+, słabo dodatni 2+ lub 1+ oraz ujemny. Oprócz jakościowej oceny tych reakcji istnieje również ocena ilościowa, która jest ważna w diagnostyce niektórych stadiów kiły i monitorowaniu skuteczności terapii

Reakcja immunofluorescencyjna (RIF) polega na wykrywaniu przeciwciał, które są znakowane specjalnym roztworem fluorescencyjnym w celu identyfikacji przeciwciał związanych z antygenem w fioletowych promieniach lampy kwarcowej. Reakcja ta jest bardzo czuła i pomaga wykryć chorobę w pierwotnym stadium kiły seronegatywnej. Test ten pomaga także zidentyfikować chorobę u pacjentów, u których choroba jest w fazie utajonej lub w późnym stadium. Istnieje kilka rodzajów takich reakcji, a najbardziej ceniony jest RIF-200, za pomocą którego można wykryć kiłę utajoną i rozpoznać niespecyficzne wyniki DCS. Jednak pomimo wysokich wskaźników RIFa-200, diagnoza następuje po przeprowadzeniu wszystkich badań klinicznych. RIF nie nadaje się do monitorowania pacjentów po zakończeniu leczenia, ponieważ jest dość powoli negatywne na etapie leczenia.

Reakcja przylegania immunologicznego (IAR). Reakcja ta opiera się na adhezji krętków uczulonych przez surowicę do czerwonych krwinek i ich wytrącaniu. Wyniki ocenia się zgodnie z poniższą tabelą:

Negatywne - 0-20%

Wątpliwe - 21-30%;

Słabo pozytywny - 31-50%;

Pozytywne - 51-100%.

Pod każdym względem RIP jest bardzo podobny do RIF i RIT. Reakcję tę przeprowadza się w kilku przypadkach, jeśli kiła nie zostanie potwierdzona na podstawie objawów klinicznych, wywiadu, badań laboratoryjnych, aby kontrolować chorobę po otrzymaniu niezbędnego leczenia i potwierdzić wyniki DCS.

Reakcja unieruchomienia Treponema pallidum (TRE) W środowisku, w którym znajdują się immobilizyny surowicy testowej i aktywny dopełniacz, treponema pallidum tracą swoją ruchliwość. Na tym właśnie opiera się ta reakcja. RIT jest metodą bardzo specyficzną i służy do rozpoznawania kiły utajonej, diagnozowania kobiet w ciąży, u których podejrzewa się kiłę, a także wielu innych przypadków, w których standardowe badania serologiczne nie są zbyt swoiste. Dużą wadą tej reakcji jest to, że jest ona bardzo kosztowna, a jej wdrożenie jest procesem bardzo trudnym. Wyniki odczytuje się według procentu unieruchomienia Treponema pallidum:

Negatywne - do 20%; - wątpliwe -21-30%; - słabo pozytywny -31-50%; -pozytywny -51-100%.

Ze względu na to, że immobilizyny pojawiają się we krwi później niż inne przeciwciała, reakcja staje się dodatnia nieco później niż w przypadku innych reakcji. Na początkowym etapie infekcji z reguły obserwuje się reakcję negatywną lub słabo pozytywną. W drugim stadium kiły, mimo że obecność immobilizyn w surowicy krwi pacjenta obserwuje się aż u 60%, to reakcja jest pozytywna u prawie połowy badanych. W przypadku nawrotu wtórnego stadium kiły wynik RIT jest dodatni u prawie 90% pacjentów. W trzeciorzędowym stadium rozwoju kiły, przy uszkodzeniu narządów wewnętrznych, w tym układu nerwowego, gdy reakcja Wassermana daje wynik negatywny, reakcja unieruchomienia Treponema pallidum jest dodatnia u prawie 100% chorych. We wczesnym stadium kiły wrodzonej reakcja jest pozytywna u prawie wszystkich pacjentów, a w późnym stadium kiły wrodzonej - u prawie 100% pacjentów. Potwierdzenie seropozytywnej kiły utajonej następuje dopiero po wykonaniu RIT, które przeprowadza się po uzyskaniu dodatnich wyników innych badań serologicznych. RIT nie jest stosowany do kontrolowania choroby u pacjentów który otrzymał niezbędne leczenie.

Immunofluorescencyjny test absorpcji z Treponema pallidum (FTA-ABS).Jeżeli reakcję przeprowadza się u pacjenta chorego na kiłę i nieleczonego, wówczas reakcja ta zawsze daje wynik pozytywny. Istnieje również duże prawdopodobieństwo wykrycia infekcji za pomocą FTA-ABS już na samym początku choroby.. Reakcja charakteryzuje się dużą czułością i swoistością. Aby zdiagnozować kiłę utajoną oraz w przypadkach, gdy wykonano już kilka badań, które dały wynik negatywny, ale klinika zgłasza zakażenie Treponema pallidum, w takich przypadkach często diagnozę stawia się na podstawie wyników FTA-ABS. Dosłownie tydzień po przedostaniu się treponema pallidum do organizmu zaczynają wytwarzać się specyficzne przeciwciała IgM, które ostatecznie przestają się pojawiać i po 2 latach nie są już wykrywalne. Aby zrozumieć, czy proponowane leczenie jest skuteczne, wykonuje się specjalne badania mające na celu określenie swoistości tych przeciwciał. Obecnie istnieje kilka takich badań, są one jednak zbyt drogie, dlatego u większości pacjentów nie wykonuje się tych badań.

Reakcja hemaglutynacji, który wykrywa specyficzne przeciwciała przeciwko Treponema pallidum (micro-RPGA). W tej reakcji treponemy służą jako antygen, więc reakcja ta jest bardzo specyficzna i w większości przypadków daje prawdziwe wyniki.

Test immunoenzymatyczny (ELISA) jeden z najbardziej specyficznych w diagnostyce kiły. Obecnie najczęściej stosowana jest pośrednia wersja testu ELISA. Zalety tej metody badawczej są oczywiste: niezbyt wysoki koszt, łatwość wdrożenia, dość duża dokładność wyniku, za pomocą tej analizy można wykryć kiłę na wczesnym etapie i szybko uzyskać wyniki.

U źródła metoda immunoblottingu polega na teście immunoenzymatycznym, który jest połączony z elektroforezą. Jest to jeden z najbardziej swoistych testów, za jego pomocą potwierdza się zakażenie kiłą.

Reakcja łańcuchowa polimerazy (konkretna metoda badawcza) w celu ustalenia rozpoznania utajonej infekcji kiłą. Podczas przeprowadzania PCR patogen znajduje się w materiale testowym, nawet w pierwotnym stadium choroby. Wykryty materiał genetyczny jest dzielony za pomocą DNA, dzięki czemu wykrycie patogenu staje się bardzo proste. W przypadku kiły neurotycznej, gdy przy innych badaniach bardzo trudno jest wykryć infekcję ze względu na bardzo małą czułość, przy kile wrodzonej, przy kile pierwotnej seronegatywnej oraz przy postawieniu diagnozy u osób zakażonych wirusem HIV, niezastąpiona jest metoda PCR. Badanie płyn mózgowo-rdzeniowy w przypadku kiły przeprowadza się go, jeśli we wczesnym stadium choroby występują zmiany kliniczne układu nerwowego, w postaci utajonej i zawsze przed rozpoczęciem leczenia. Test ten jest również przepisywany pacjentom z kiłą układu nerwowego w późniejszych stadiach kiły i w postaci utajonej. W laboratorium klinicznym bada się cytozę, zawartość białka, reakcje Pandeya i Nonne-Apelta. W laboratoriach serologicznych przeprowadza się reakcję Wassermana, reakcję Lange, RIF, RIFyu, RIFts, RIT.

Na stronie znajdują się informacje referencyjne wyłącznie w celach informacyjnych. Diagnozowanie i leczenie chorób musi odbywać się pod nadzorem specjalisty. Wszystkie leki mają przeciwwskazania. Wymagana konsultacja ze specjalistą!

Wizyta u wenerologa – dlaczego jest konieczna?

Anamneza– zebranie informacji niezbędnych do postawienia diagnozy: skarg pacjentów, informacji o niektórych aspektach życia seksualnego i kontaktach z osobami podejrzanymi o współżycie choroby weneryczne osoby. Choroby przenoszone drogą płciową przebyte w przeszłości, informacja o wynikach ich leczenia. Wszystkie te informacje pozwalają lekarzowi prowadzącemu skoncentrować się na najbardziej prawdopodobnych schorzeniach, które zmusiły pacjenta do poszukiwania specjalistycznej pomocy.

Śledzony przez badanie kliniczne. Najdokładniejszym badaniom poddawane są błony śluzowe i skóra narządów płciowych, okolicy odbytu i błony śluzowej jamy ustnej. Zwiększoną uwagę zwraca się na badanie palpacyjne zewnętrznych grup węzłów chłonnych i badanie palpacyjne zidentyfikowanych zakaźnych ognisk martwiczych. Często na tym etapie diagnozę kiły można postawić z dość dużym prawdopodobieństwem.

Aby jednak postawić ostateczną diagnozę, a także monitorować dynamikę procesu w trakcie leczenia, konieczne jest przeprowadzenie testy laboratoryjne.

Laboratoryjne potwierdzenie kiły – co obejmuje i jak się to odbywa?

2. Bezpośrednia reakcja fluorescencji. Ta metoda diagnostyczna poprzedzona jest działaniem biomateriału specjalnym serum fluorescencyjnym, co prowadzi do przyłączenia się specyficznych kompleksów immunologicznych do powierzchni Treponema pallidum. W wyniku tej reakcji podczas mikroskopii poddanego obróbce biomateriału w mikroskopie fluorescencyjnym Treponema pallidum wygląda świetliście i elegancko.

3. PCR ( reakcja łańcuchowa polimerazy). Metoda ta pozwala na identyfikację DNA czynnika zakaźnego, uwidaczniając jego obecność w organizmie pacjenta.

Jak wykrywa się immunologiczne objawy kiły i dlaczego należy je wykryć?
Cała grupa badań parametrów immunologicznych w celu diagnostyki chorób zakaźnych to tzw serologia. Obecnie istnieje wiele metod diagnostyki serologicznej, jednak wszystkie łączy fakt, że biomateriałem w diagnostyce jest krew pacjenta. Ze względu na diagnostykę kiły wszystkie badania serologiczne można podzielić na krętkowe – wykrywające przeciwciała przeciwko elementom strukturalnym krętka bladego i niekrętkowe – wykrywające zmiany immunologiczne związane z konsekwencjami działania bakterii.

Serologia niekrętkowa
1. Reakcja mikrostrącania (VDRL). Test ten wykrywa przeciwciała we krwi pacjenta wytwarzane przez układ odpornościowy przeciwko komórkom uszkodzonym przez Treponema pallidum. Test ten charakteryzuje się wysoką wiarygodnością, ale niską swoistością. Faktem jest, że we krwi mogą występować wykrywalne przeciwciała w przypadku wielu chorób i stanów patologicznych. Dlatego ten test jest stosowany wyłącznie jako badanie przesiewowe w celu identyfikacji podejrzanej choroby. Metoda ta ma jednak nieocenioną zaletę w diagnozowaniu skuteczności leczenia. Po wyleczeniu pacjenta mikroreakcja strącania z antygenem kardiolipiny staje się ujemna, w przeciwieństwie do innych badań serologicznych, które mogą dawać pozytywny wynik przez długi czas.

2. Reakcja Wassermana. Badanie to jest związane z reakcją wiązania dopełniacza – jednym z mechanizmów realizacji odpowiedzi immunologicznej.
Wynik testu jest pozytywny ( nie w krzyżach, jak wielu ludzi myśli!). A reakcja jest negatywna ( w wyniku badania wskazany jest minus), wątpliwe ( w wyniku badania wskazany jest 1 plus +), słabo pozytywny ( w wyniku badania wskazano 2 plusy ++), reakcja pozytywna ( w wyniku badania wskazano 3 plusy +++), reakcja zdecydowanie pozytywna ( w wyniku badania wskazano 4 plusy ++++).

Serologia krętkowa
1. Reakcja immunofluorescencyjna (RIF). Ten rodzaj testu wykrywa przeciwciała wytwarzane przez układ odpornościowy osoby zakażonej. W tym celu surowica krwi pacjenta wchodzi w interakcję z konkretnym lekiem zawierającym przeciwciała. Po zmieszaniu osocza krwi pacjenta i odczynnika ze specyficznymi przeciwciałami znakowanymi specjalną substancją fluorescencyjną, wiążą się one. Badanie przeprowadza się za pomocą specjalnego mikroskopu fluorescencyjnego.

2. Test immunoenzymatyczny (ELISA). Warto omówić tę analizę bardziej szczegółowo. Ponieważ jest głównym czynnikiem identyfikującym większość chorób zakaźnych. Metoda opiera się na selektywnej, wysoce specyficznej reakcji antygen-przeciwciało. Jedną z cech tej analizy jest to, że może pomóc w identyfikacji przeciwciał różnych klas ( IgA IgM IgG ) . Ważna jest również zdolność tej analizy do określenia ilości wykrytych przeciwciał. W rezultacie określenie rodzaju przeciwciał i ich składowej ilościowej pozwala na wyciągnięcie szeregu wniosków na temat czasu trwania choroby, dynamiki procesu, aktywności patogenu i układu odpornościowego pacjenta. W rezultacie analiza ta okazała się niezbędna w diagnostyce chorób zakaźnych, a także monitorowaniu dynamiki choroby na tle leczenia.

3. Pasywna reakcja hemaglutynacji (RPHA). Reakcja ta opiera się na indukowanej immunologicznie adhezji czerwonych krwinek. Mechanizm tej reakcji polega na wstępnym przygotowaniu czerwonych krwinek, na powierzchni których utrwalone są składniki białkowe Treponema pallidum. Dlatego po zmieszaniu z osoczem krwi zawierającym przeciwciała przeciwko krętkowi, czerwone krwinki sklejają się - krew zmienia kolor z czerwonego na ziarnisty. Reakcja hemaglutynacji staje się dodatnia 4 tygodnie po zakażeniu. Po skutecznym leczeniu kiły reakcja ta może pozostać pozytywna przez całe życie.

Z powyższego jasno wynika, że ​​diagnoza, monitorowanie skuteczności leczenia i wyleczenia jest pracą dość złożoną i czasochłonną. A pacjent bez wykształcenia medycznego nie jest w stanie zrozumieć celów i wyników badania. Postaramy się jednak przedstawić w przystępnej formie dynamikę zmian immunologicznych w różnych stadiach kiły oraz wskaźniki laboratoryjne ujawniające te zmiany.

Zatem - trochę teorii. Po zakażeniu komórki odpornościowe najpierw napotykają Treponema pallidum. Identyfikując go jako obcy mikroorganizm, komórki immunokompetentne zaczynają aktywnie tworzyć odpowiedź immunologiczną. Przeciwciała działające specyficznie na klasę Treponema pallidum IgM, wykrywa się we krwi pacjenta 7 dni po zakażeniu przeciwciała IgG zsyntetyzowany później – po 4 tygodniach. Te dwie klasy przeciwciał różnią się budową, ale dla diagnozy ważne jest to IgM syntetyzowany we wczesnych stadiach infekcji ( co wskazuje na niedawną infekcję) lub w obecności dużej aktywności infekcji. Wykrycie IgG wskazuje jedynie na powstanie trwałej odporności na tę infekcję, dopiero seria analiz miana przeciwciał w czasie pozwala ocenić wyleczenie choroby lub aktywność infekcji. Antylipidowe ( niespecyficzny) kompleksy immunologiczne są aktywnie syntetyzowane 4 - 5 tygodni po zakażeniu.
Ważne jest, aby w okresie klinicznych objawów kiły we krwi wykryto przeciwciała specyficzne dla Treponema pallidum, takie jak IgM i klasa IgG (całkowite przeciwciała). Ważnym parametrem w procesie leczenia jest zmiana parametrów ilościowych przeciwciał. Odpowiednio dobrany zabieg przyczynia się do gwałtownego spadku koncentracji IgM, na tle stabilnego poziomu IgG– wskaźniki te wskazują na powstanie stabilnej odporności na Treponema pallidum na tle zmniejszenia jego aktywności zakaźnej. Należy zwrócić uwagę na fakt, że specyficzne przeciwciała przeciwko krętkowi mogą utrzymywać się we krwi człowieka przez wiele lat, dając pozytywne wyniki w niektórych rodzajach badań.

Jak interpretować wyniki badań serologicznych?

Testy Reagina służą do masowych badań przesiewowych pacjentów w kierunku kiły. Wykonywane są najczęściej w ramach badań profilaktycznych. Badania takie dostępne są w każdej placówce medycznej i przeprowadzane są błyskawicznie. Odpowiedź jest zwykle gotowa po 30-40 minutach.

Dodatni wynik reakcji odczynowych nie jest kryterium do postawienia diagnozy. Konieczne są dodatkowe badania specyficzne dla gatunku.

Najpopularniejszą metodą przesiewową jest reakcja Wassermana. Wykorzystuje antygeny kardiolipinowe i krętkowe. Jeśli w surowicy krwi nie ma odczynów, nastąpi hemoliza czerwonych krwinek owiec, które są dodawane jako wskaźnik.

W obecności odczynników wytrącą się całe czerwone krwinki, w takim przypadku reakcję uważa się za pozytywną.

Reagin w następujących przypadkach:

• inne choroby, których czynniki sprawcze mają podobną strukturę antygenową do bladego krętka
• ciąża
• choroby onkologiczne
• branie salicylanów
• zawał mięśnia sercowego
• błędy techniczne podczas analizy

Jeżeli reakcja odczynu jest pozytywna, wykonuje się specyficzne badania serologiczne. Są również przepisywane, jeśli wynik negatywny jest wątpliwy.

Antygeny krętkowe wykorzystywane są w testach takich jak RIF, RIT, ELISA, RPGA, reakcja hemadsorpcji w fazie stałej. Reakcje te opierają się na tworzeniu kompleksów antygen-przeciwciało i różnią się sposobem ich oznaczania. Najczęściej stosowana jest reakcja immunofluorescencyjna.

Lek jest leczony surowicą luminescencyjną, która umożliwia oznaczenie kompleksów immunologicznych pod mikroskopem luminescencyjnym.

Jedną z najbardziej czułych reakcji serologicznych w diagnostyce kiły jest RPGA. Metoda jest bardzo dokładna. Często wykorzystuje się je do weryfikacji diagnozy w czasie ciąży, gdy inne badania mogą dać wynik fałszywie dodatni.

Cechy serodiagnostyki

Dla diagnostyka serologiczna kiły w różnych jej okresach krew pobierana jest z żyły. Zaleca się przeprowadzanie analizy na czczo, zmniejsza to liczbę wyników fałszywie dodatnich. Probówka musi być sterylna. Podczas wykonywania badań ekspresowych w niektórych przypadkach pobierana jest krew z palca.

W przypadku podejrzenia pobiera się płyn mózgowo-rdzeniowy do diagnostyki serologicznej. Aby to przeanalizować, stosuje się te same techniki, co w przypadku badań krwi.

Aby zdiagnozować kiłę, należy przejść pełne badanie w naszej klinice.