Серологическая диагностика сифилитической инфекции. Современные лабораторные методы и алгоритмы диагностики сифилиса. Как интерпретировать тесты на сифилис

Таксономия боррелий, лептоспир и трепонем, и названия заболеваний, вызываемых ими.

Семейство:Spirochaetaceae

Род: Borrelia

Вид: B. recurrentis – возбудитель эпидемического возвратного тифа.

Род: Treponema

Вид: T. pallidum - возбудитель сифилиса

Род: Leptospira

Вид: L. Icterohaemorrhagiae – возбудитель лептоспироза

Микроскопическая диагностика сифилиса.

Темнопольная микроскопия: перед исследованием берут тканевую жидкость со дна язвы или пунктат лимфатического узла. Готовят препарат раздавленной капли: на середину предметного стекла наносят каплю исследуемого материала, каплю накрывают покровным стеклом так, чтобы не было пузырьков воздуха. Положительный результат: при микроскопии обнаруживаются трепонемы с равномерными 8-12 крупными завитками. Для них характерны плавные вращательно-поступательные, маятникообразные и сгибательные движения.При окраске по Романовскому-Гимзе: возбудитель сифилиса окрашивается в бледно-розовый цвет, другие трепонемы – в красновато-фиолетовый.

Реакции, используемые в серодиагностике сифилиса. Общая характеристика каждой из них.

РСК (реакция Вассермана): Компоненты: 1 система – сыворотка больного, диагностикум, комплемент, ИХН; 2 система – гемолитическая сыворотка и взвесь эритроцитов барана. Готовят 1 систему, инкубируют 37С 1 ч. Добавляют вторую, инкубируют 37С 1 ч. Положительный результат – отсутствие гемолиза.

РПГА : Компоненты: ИХН, сыворотка больного, эритроцитарный диагностикум. Готовят разведения сыворотки, добавляют диагностикум, в термостат 24 ч 37С. Пол. результат: зонтик.

ИФА : Компоненты: сыворотка больного, диагностикум, конъюгат, хромогенный субстрат. Связывают диагностикум с пластиком лунки планшета, вносят разведенную сыворотку, конъюгат и субстрат. Пол. результат: изменение окраски субстрата.

Непрямая РИФ : на предметное стекло наносят АГ – бледные трепонемы (штамм Никольса). Мазки высушивают на воздухе и фиксируют в ацетоне 5 минут. Сыворотку больного истощают взвесью непатогенных трепонем штамма Рейтера или разводят 1:200, затем наносят на приготовленные препараты. Выдерживают во влажной камере при 35С 30 мин (1 фаза). Мазки промывают 10 минут в ИХН и высушивают. Далее наносят на препарат каплю флюоресцирующей сыворотки против глобулина человека и инкубируют во влажно камере при комнатной температуре 30 мин (2 фаза). Мазки промывают ИХН, высушивают. Просматривают в люминесцентном микроскопе. Положительная реакция: зеленое свечение.

Реакция флоккуляции на стекле : плазму крови или непрогретую сыворотку смешивают с неспецифическим липидным антигеном в течение нескольких минут на предметном стекле. Положительный результат: под малым увеличением видны укрупненные частицы антигена (флоккулят).

Серодиагностика сифилиса с использованием РПГА.

Компоненты: ИХН, сыворотка больного, эритроцитарный диагностикум. Готовят разведения сыворотки, добавляют диагностикум, в термостат 24 ч 37С. Пол. результат: зонтик.

Серодиагностика сифилиса с использованием ИФА.

Компоненты: сыворотка больного, диагностикум, конъюгат, хромогенный субстрат. Связывают диагностикум с пластиком лунки планшета, вносят разведенную сыворотку, конъюгат и субстрат. Пол. результат: изменение окраски субстрата.

Серодиагностика сифилиса с использованием РСК.

Реакция Вассермана: можно использовать сыворотку крови больного и спинномозговую жидкость (на стадии нейросифилиса). В качестве диагностикума – трепонемный или кардиолипиновый антиген. Компоненты: 1 система – сыворотка больного, диагностикум, комплемент, ИХН; 2 система – гемолитическая сыворотка и взвесь эритроцитов барана. Готовят 1 систему, инкубируют 37С 1 ч. Добавляют вторую, инкубируют 37С 1 ч. Положительный результат – отсутствие гемолиза.

Методы микробиологической диагностики лептоспироза.

Бактериоскопический метод : готовят препарат раздавленной капли, изучают его в темнопольном микроскопе: подвижные тонкие нити с изгибами на концах (вторичные завитки) – в виде скобы или буквы S.

Бактериологический метод : материал – кровь, моча, спинномозговая жидкость. Материал засевают (3-5 пробирок) в водно-сывороточную среду, среду Флетчера, Картофа. Инкубируют до 30 суток при 28-30С в атмосфере СО 2 . Для выявления роста лептоспир через 10 дней после посева из пробирки берут материал, готовят препарат раздавленной кали и изучают в темнопольном микроскопе. Из пробирки, где обнаружен рост лептоспир, пересевают в 3 пробирки со свежей питательной средой, инкубируют 7-10 дней, температура та же. Для дифференциации проводят бикарбонатный тест, определяют гемолитическую активность, фосфолипазную активность. Идентифицируют по антигенной структуре с помощью агглютинирующих сывороток.

Биологическое исследование : морским свинкам вводят внутрибрюшинно 1 г исследуемого материала и наблюдают в течение месяца, отмечая температуру и вес тела, появление желтухи и кровоизлияний, а также гибель животного.

Серологическое исследование : АТ в сыворотке появляются со 2 недели. Используют реакции микроагглютинации и лизиса лептоспир. Сыворотку больного разводят двукратно от 1:100 до 1:1600. В ряд пробирок вносят 0,2 мл разведенной сыворотки и такое же количество живой культуры штаммов лептоспир. Инкубируют 1 час при 37С. Из содержимого каждой пробирки готовят препарат раздавленной капли и микроскопируют. АТ в сыворотке первых разведений обусловливают лизис – растворение или зернистое набухание лептоспир. В последующих разведениях – агглютинация – агломераты в виде паучков. Диагностическое значение имеет положительная реакция в разведении 1:400 и выше.

1. Потекаев Н.Н., Фриго Н.В., Алмазова А.А., Лебедева Г.А. Эпидемиология сифилиса в современных условиях. Клиническая дерматология и венерология . 2015;1:22-34.
2. Larsen SA, Steiner BM, Rudolph AH. Laboratory Diagnosis and Interpretation of Tests for Syphilis. Clin Microbiol Rev 1995 Jan;1-21.
3. Coles AC. Spirochaeta pallida. Methods of examination and detection, especially by means of the dark-ground illumination. Br Med 1909;1:1117-1120.
4. Kellogg, DSJr, Mothershed SM. Immunofluorescent detection of Treponema pallidum : a review. JAMA 1969;107:938-941.
5. Mullis KB. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase catalysed chain reaction. Meth Enzymol . 1987;155:335.
6. Centurion-Lara A. Detection of Treponema pallidum by a sensitive reverse transcriptase PCR. J Clin Microbiol . 1997;35;6:1348-1352.
7. Wassermann A, Neisser A, Brück C. Eine serodiagnostische Reaktion bei Syphilis. Dtsch Med Wochenschr . 1906;32:745-746.
8. Pangborn MC. Cardiolipin and its application in a chemically purified antigen for the serodiagnosis of syphilis. Proc N Y State Assoc Public Health Lab . 1946;26(1):26-29.
9. Pangborn MC. A study of the composition of cardiolipin. Fed Proc . 1946;5(1 Pt 2):149.
10. Дмитриев Г.А., Брагина Е.Е. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса. Часть I. Вестник дерматологии. 1996;2:29-33.
11. Дмитриев Г.А., Брагина Е.Е. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса. Часть II. Вестник дерматологии. 1996;3:33-38.
12. Неспецифические положительные результаты серологических реакций на сифилис. Количественные модификации современных серологических реакций . Методические рекомендации. М. 1990.
13. Приказ МЗ №87 РФ от 26 марта 2001 г. «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса».
14. Российское общество дерматовенерологов. Федеральные клинические рекомендации по ведению больных сифилисом. М. 2013.
15. Ляхов В.Ф., Борисенко К.К., Потекаев Н.С., и др. Динамика трепонемоспецифической иммуноглобулинемии при ранних формах сифилиса. Вестник дерматологии. 1990;8:38-42.
16. Киселева Г.А., Ткачев В.К., Беднова В.Н., и др. Сравнительное из­учение чувствительности и специфичности трех иммуноферментных тест-систем, предназначенных для выявления иммуноглобулинов класса М к возбудителю сифилиса. Вестник дерматологии. 2000;4:6-10.
17. Эрматова Ф.А. Определение специфических иммуноглобулинов класса М для ранней диагностики сифилиса (клинико-лабораторное исследование): Дис. … канд. мед. наук. М. 2014.
18. Марданлы С.Г., Арсеньева В.А., Анискова И.Н., Жигаленко А.Р. Оте­чественная тест-система «Лайн-Блот Сифилис-IgM» для определения IgM-антител к Treponema pallidum методом линейного иммуноблоттинга Клиническая дерматология и венерология. 2013;5:35-38.
19. Гусева С.Н. Использование теста IgM-РИФабс в обследовании беременных на активность сифилитической инфекции. Российкий журнал кожных и венерических болезней. 2004;6:60-63.
20. Овчинников Н.М., Беднова В.Н., Делекторский В.В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем . М. 1987.
21. Lee K, Park H, Roh EY, Shin S, Park KU, Park MH, Song EY. Characterization of sera with discordant results from reverse sequence screening for syphilis. Biomed Res Int . 2013;2013:269-347.
22. Binnicker MJ. Which algorithm should be used to screen for syphilis? Curr Opin Infect Dis . 2012 Feb;25(1):79-85.
23. Castro A, Jost H, Cox D, Fakile Y, Kikkert S, Tun Y, Zaidi A, Park M. A comparison of the analytical level of agreement of nine treponemal assays for syphilis and possible implications for screening algorithm. BMJ Open . 2013 Sep 19;3(9).
24. Park IU, Chow JM, Bolan G, Stanley M, Shieh J, Schapiro JM. Screening for syphilis with the treponemal immunoassay: analysis of discordant serology results and implications for clinical management. J Infect Dis . 2011 Nov;204(9):1297-1304.

Российский национально исследовательский медицинский университет им. Н.И.Пирогова

Кафедра дерматовенерологии педиатрического факультета

Доклад на тему: Лабораторные методы диагностики сифилиса

Выполнил: Студент 440 в группы

Педиатрического факультета

Серанов Игорь Анатольевич

Нетрепонемные исследования

Трепонемные исследования

Комплекс проведения серологических реакций

Реакция Вассермана

Реакция иммунофлюоресценции

Реакция имунного прилипания

Реакция иммобилизации бледных трепонем

Реакция иммунофлюоресценцией адсорбцией бледных трепонем

Реакция гемагглютинационная

Иммуноферментный анализ

Полимеразная цепная реакция

Все серологические методы исследования, которые применяются на сегодня, условно разделяются на два вида: нетрепонемные , отборочные (НТТ)- и трепонемные , которые подтверждают наличие возбудителя (ТТ).Сифилис протекает очень сложно, клиника очень смазана и не всегда проявляется, поэтому для постановления правильного диагноза используют сразу несколько серологических тестов. При визуалированном подтверждении присутствия во взятом материале бледной трепонемы (при помощи микроскопа) диагноз ставится сразу же, и остальные тесты проводятся редко.

Нетрепонемные исследования (тесты) - НТТ - это так называемые отборочные исследования, они не очень дорого стоят и при их помощи можно обследовать достаточно большое число пациентов, к тому же результаты при многих тестах готовы очень быстро. Но при ложном течении заболевания, при низкой чувствительности проведение таких тестов нецелесообразно, 100%-ный результат получить не удастся.

При проведении нетрепонемных тестов в материале, который исследуется, обнаруживаются антитела, которые реагируют с кардиолипин - лецитиновым антигеном . Одним из первых тестов был метод, основанный на иммунологической реакции Борде - Жангу, где в качестве антигена выступал экстракт печени новорожденного ребёнка, который умер от сифилиса. На сегодня при проведении таких тестов антигеном выступают лецитин, холестерин и кардиолипин .

За границей, в частности в США используют 4 нетрепонемных метода, которые делятся на два вида: методы, которые позволяют визуально определить результаты реакции (RPR и TRUST) и методы микроскопического считывания результатов(USR и VDRL).

К нетрепонемным методам диагностики относится непрямой иммуноферментный анализ с использованием кардиолипина в качестве антигена. У нас в стране и в странах СНГ в качестве нетрепонемных тестов выступают реакция плазмы с инактивированной сывороткой (МР) и реакция, при которой происходит связывание комплимента с кардиолипином (РСК) .

Все методы нетрепонемной диагностики очень похожи друг с другом. У них у всех невысокая стоимость, их просто и быстро провести. Эти виды тестов не подходят при выявлении заболевания на первичной стадии и при сифилисе, который протекает скрытно (латентная форма сифилиса). Антитела, которые определяются нетрепонемным тестом появляются, где то через месяц после инфицирования трепонемой. В большинстве случаев у больных, которые лечили первичную стадию сифилиса, примерно около года нетрепонемные тесты имеют отрицательный результат.

Трепонемные исследования (тесты) - ТТ стоят намного дороже, техника проведения их очень сложная и они используются для подтверждения положительных результатов, которые были получены при нетрепонемных исследованиях.

Как мы говорили выше трепонемные методы применяют для того, чтобы подтвердить наличие бледной трепонемы в организме, которое было выявлено при помощи нетрепонемных тестов. Так же их проводят, если проводимые анализы так и не дали положительного результата, но клиника предполагает наличие заболевания. После полного излечения сифилиса более чем у 80% вылечившихся наблюдается положительная реакция при проведении трепонемных тестов ещё несколько лет, а у некоторых - всю жизнь. Исходя из этого трепонемные тесты не используют для профилактических осмотров у людей, которые прошли полный курс лечения.

Научные исследования в области иммунологии и молекулярной биологии продолжаются постоянно и при помощи новейших технологий появляются всё новые тесты для диагностики сифилиса, которые прочно занимают лидирующие позиции. Один из таких тестов, который прочно вошёл в практику - иммуноферментный анализ (ИФА) , а многие исследовательские методы находятся на стадиях разработки.

Тот комплекс проведения серологических исследований , который проводят в России включает в себя комплексное проведение серологических реакций:

стандартных серологических реакций –

реакцию связывания комплемента(реакция Вассермана),

реакцию с трепонемным антигеном и реакцию с кардиолипином;

груповых трепонемных реакций-

реакцию иммунофлюоресценции (РИФ)

реакцию иммунного прилипания(РИП);

видоспецифических протеиновых трепонемных реакций –

реакцию иммобилизации трепонем(РИТ),

РИФ - абс и её варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS),

реакцию пассивной гемаглюцинации трепонем(РПГА).

Если серологические реакции использовать в комплексе, это даст возможность выявить заболевание на ранних этапах заболевания.

Реакция Вассермана - это метод связывания комплемента. Для проведения реакции в качестве антигена используют экстракты, которые изготавливаются из бледных трепонем (специфические антигены) и кардиолипин - это экстракт приготовленный из сердечной мышцы быка(неспецифические антигены). Чем больше в исследуемом материале наблюдается бледных трепонем, тем больше степень заболевания и оценивают степень плюсами:

1) - отрицательная; 2) + сомнительная; 3) ++ слабоположительная; 4) +++ положительная; 5) ++++ резкоположительная.

Реакцию Вассермана (Реакция связывания комплемента) в обязательном порядке проводят вместе с осадочными реакциями – Закс - Витебского и Кана. Иммунологическая природа реакций, в общем- то такая же, как и у реакции Вассермана, но для этих реакций требуются более насыщенные антигены, которые при вступлении в реакцию с реагинами сыворотки дают больший осадок. Серонегативный первичный сифилис ставят, если стандартные серологические реакции дали отрицательный результат. Выявление сифилиса реакцией Вассермана эффективно при серопозитивном вторичном сифилисе, здесь результаты теста на 100% верны . На третичной стадии активного сифилиса результаты верны у более половины больных, а на последних стадиях сифилиса, при поражении внутренних органов и систем, результаты верны у половины больных. У больных ранним врождённым сифилисом серологические реакции дают положительный результат почти всегда , а у больных с поздним врождённым сифилисом - почти в 80% случаев.

Принцип РСК заключается в том, что реагины, находящиеся в сыворотке крови больных сифилисом, обладают свойством вступать в соединения с различными антигенами. Образовавшиеся комплексы сортируют введенный в реакцию комплемент. Для индикации комплекса реагины–антиген–комплемент используется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой). При наличии комплекса эритроциты выпадают в осадок. Что заметно не вооруженынм глазом. Выраженность гемолиза обозначается врачом ключами: резко положительная 4+, положительная 3+, слабоположительная 2+ ли 1+ и отрицательная. Кроме качественной оценки этих реакций имеется и количественная, имеющая значение в диагностике некоторых стадий сифилиса и при контроле за эффективностью терапии

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) основана на выявлении антител, которые метят специальным флуоресцентным раствором, для того, чтобы в фиолетовых лучах кварцевой лампы выявить соединённые с антигеном антитела. Эта реакция имеет высокую чувствительность и помогает выявить заболевание на первичной стадии серонегативного сифилиса. Так же именно этот тест помогает выявить заболевание у пациентов, у которых заболевание протекает латентно или на поздних стадиях. Существует несколько типов таких реакций и наиболее высоко ценится РИФ-200, при помощи, которой можно выявлять скрытый сифилис и распознать неспецифические результаты КСР. Но, несмотря на высокие показатели РИФа-200, постановка диагноза происходит после проведения всех клинических анализов. РИФ не подходит для наблюдения за пациентами после проведения полного лечения , так как достаточно медленно негативируется на этапе проведения лечения.

Реакция иммуного прилипания (РИП) . В основе этой реакции лежит прилипание трепонем, которые сенсибилизированны сывороткой, к эритроцитам и выпадение их в осадок. Результаты оцениваются по следующей таблице:

Отрицательная- 0-20%

Сомнительная-21-30%;

Слабоположительная-31-50%;

Положительная-51-100%.

По всем показателям РИП очень похожа на РИФ и РИТ. Эта реакция проводится в нескольких случаях, если на основании клинических проявлений, анамнеза, лабораторных исследований сифилис не подтверждается, для контроля за заболеванием после получения необходимого лечения и для подтверждения результатов КСР.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ) .Попав в среду, где есть иммобилизины испытуемой сыворотки и активный комплемент, бледные трепонемы теряют подвижность. На этом и основывается эта реакция. РИТ очень специфична и применяется для распознания скрытого сифилиса, для диагностики беременных, у которых подозревают сифилис и многих других случаев, при которых стандартные серологические тесты мало специфичны. Большой недостаток этой реакции то, что она стоит очень дорого и её проведение - очень сложный процесс. Результаты считываются по процентным данным иммобилизации бледных трепонем:

Отрицательная - до 20%; -сомнительная -21-30%; -слабоположительная -31-50%; -положительная -51-100%.

В связи с тем, что иммобилизины появляются в крови позже других антител, реакция становится положительной немного позже, чем при проведении других реакций. На первичном этапе инфицирования, как правило, наблюдается отрицательная или слабоположительная реакция. На вторичном этапе сифилиса, хотя появление иммобилизинов в сыворотке крови у больного наблюдается до 60%, реакция положительна почти у половины исследуемых. При рецидиве вторичной стадии сифилиса РИТ положительна почти у 90% больных. На третичной стадии развития сифилиса, при поражении внутренних органов, в том числе и нервной системы, когда реакция Вассермана даёт отрицательные результаты, реакция иммобилизации бледных трепонем положительна почти у 100% больных. На раннем этапе врождённого сифилиса реакция имеет положительный результат почти у всех больных, а на позднем этапе врождённого сифилиса - почти у 100% больных. Серопозитивный латентный сифилис подтверждается только после проведения РИТ, которую проводят после получения положительных результатов при проведении других серологических реакций. РИТ не применяют для контроля за заболеванием у больных , которые получили необходимое лечение.

Реакция иммунофлуоресценции абсорбции с бледной трепонемой (FTA-ABS) .Если реакцию проводят для больного, который болен сифилисом и не лечился, то тогда эта реакция даёт положительный результат всегда. Так же высока вероятность выявить инфекцию при помощи FTA-ABS в самом начале заболевания . Реакция обладает большой чувствительностью и специфичностью. Для диагностики латентного сифилиса и в тех случаях, когда уже было проведено несколько тестов и они показали отрицательный результат, но клиника говорит о инфицировании бледной трепонемой, в таких случаях диагноз ставят часто опираясь на результаты FTA-ABS. Буквально через неделю после того, как бледная трепонема попала в организм, начинают вырабатываться специфические антитела IgM, которые со временем перестают появляться и через 2 года уже не определяются. Для того, чтобы понять даёт ли предложенное лечение эффект, проводят специальные тесты, которые определяют специфичность этих антител. Таких тестов на сегодня есть несколько, но проведение их слишком дорого, поэтому для большинства больных эти тесты не проводят.

Гемагглютинационная реакция , которая определяет специфические антитела к бледной трепонеме (микро-РПГА). Для этой реакции в качестве антигена служат трепонемы, поэтому эта реакция очень специфична и даёт правдивые результаты в большинстве случаев.

Иммуноферментный анализ (ИФА) один из наиболее специфичных для диагностики сифилиса. На сегодня чаще всего используют непрямой вариант ИФА. Преимущества этого метода исследования очевидны: не слишком большая стоимость, лёгкость проведения, достаточна высокая точность результата, при помощи этого анализа можно выявить сифилис на ранней стадии, быстрое получение результатов.

В основе метода иммуноблотинга лежит иммуноферментный анализ, который сочетается с электрофорезом. Является одним из самых специфичных анализов и при его помощи происходит подтверждение инфицирования сифилисом.

Полимеразную цепную реакцию (специфический метод исследования) проводят для установления диагноза при скрытых течениях сифилисной инфекции. При проведении ПЦР в испытуемом материале находят возбудителя, даже на первичном этапе заболевания. Обнаруживаемый генетический материал при помощи ДНК делится и таким образом обнаружить возбудителя становится очень просто. При нейросифилисе, когда выявить инфекцию бывает очень затруднительно при проведении других анализов из-за очень низкой чувствительности, при врождённом сифилисе, при первичной стадии серонегативного сифилиса и для постановки диагноза у ВИЧ-инфицированных проведение ПЦР незаменимо. Исследование спинномозговой жидкости при сифилисе проводят, если есть клинические поражения нервной системы на ранней стадии заболевания, при скрытой форме и обязательно ещё до начала лечения. Так же этот анализ назначается для больных нейросифилисом на поздних стадиях сифилиса и при латентной форме. В клинической лаборатории проводят исследование цитоза, содержание белка, реакции Панди и Нонне - Апельта. В серологических лабораториях проводится реакция Вассермана, реакция Ланге, РИФ, РИФю,РИФц, РИТ.

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Обращение к врачу венерологу – зачем это нужно?

Анамнез – сбор необходимой для выявления диагноза информации: жалобы пациента, информация о некоторых аспектах половой жизни и контактах с подозрительными на наличие венерических заболеваний лицами. Перенесенные в прошлом венерические заболевания, информация о результатах их лечения. Вся эта информация позволяет лечащему врачу сконцентрироваться на наиболее вероятных заболеваниях заставивших пациента обратиться за специализированной помощью.

Далее следует клинический осмотр . Наиболее внимательному осмотру подвергаются слизистые и кожные покровы половых органов, область ануса, слизистая ротовой полости. Повышенное внимание уделяется ощупыванию наружных групп лимфоузлов, ощупыванию выявленных инфекционно некротических очагов. Часто на данном этапе диагноз сифилиса с достаточно высокой степенью вероятности можно выставить.

Однако для выставления окончательного диагноза, а так же для слежения за динамикой процесса в ходе проводимого лечения, необходимо проведение лабораторных анализов .

Лабораторное подтверждение сифилиса – что в себя включает и как производится?

2. Прямая реакция флюоресценции. Данному методу диагностики предшествует обработка биоматериала специальной флюоресцирующей сывороткой, что приводит к прикреплению на поверхности бледной трепонемы специфических иммунных комплексов. В результате этой реакции при микроскопии обработанного биоматериала в люминесцентном микроскопе бледная трепонема выглядит светящейся и нарядной.

3. ПЦР (полимеразная цепная реакция ). Данный метод позволяет выявить ДНК инфекционного агента, делая его присутствие в организме пациента явным.

Как выявляются иммунологические признаки наличия сифилиса, и зачем их нужно выявлять?
Вся группа исследований иммунологических показателей с целью диагностики инфекционных заболеваний называется серологией . В наше время существует множество серологических методов диагностики, однако всех их объединяет то, что в диагностике биоматериалом является кровь пациента. В отношении диагностики сифилиса все серологические тесты можно разделить на трепонемные – выявляющие антитела против структурных элементов бледной трепонемы и нетрепонемные – выявляющие иммунологические изменения, связанные с последствием деятельности бактерии.

Нетрепонемная серология
1. Микрореакция преципитации (VDRL). Данное исследование выявляет в крови пациента антитела, вырабатываемые иммунной системой против клеток, поврежденных бледной трепонемой. Данный тест обладает высокой достоверностью, но малой специфичностью. Дело в том, что выявляемые антитела могут присутствовать в крови при многих заболеваниях и патологических состояниях. Потому данный тест используют лишь как скрининг заболевания, выявляющий подозрение на заболевание. Однако этот метод обладает неоценимым преимуществом в диагностике эффективности проводимого лечения. В случае излечения пациента микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном становится негативной в отличие от других серологических видов исследования, которые еще долгое время могут давать положительный результат.

2. Реакция Вассермана. Данное исследование связано с реакцией связывания комплемента – один из механизмов реализации иммунологического ответа.
Тест оценивается в плюсах (не в крестах, как считают многие! ). И реакция бывает отрицательной (в результате обследования указывается минус ), сомнительной (в результате обследования указывается 1 плюс + ), слабоположительной (в результате обследования указывается 2 плюса ++ ), положительная реакция (в результате обследования указывается 3 плюса +++ ), резко положительная реакция (в результате обследования указывается 4 плюса ++++ ).

Трепонемная серология
1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Данный вид исследования выявляет антитела, вырабатываемые иммунной системой инфицированного человека. Для этого производится взаимодействие сыворотки крови пациента и специфического препарата, содержащего антитела. После смешивания плазмы крови пациента и реактива со специфическими антителами, меченными специальным флюоресцирующим веществом, происходит их связывание. Исследование производится посредством специального люминесцентного микроскопа.

2. Иммуноферментный анализ (ИФА). О данном анализе стоит рассказать поподробнее. Так как он является основным при выявлении большинства инфекционных заболеваний. Основан метод на избирательной высокоспецифичной реакции антиген – антитело. Одной из особенностей данного анализа является то, что с его помощью можно выявить антитела различных классов (IgA IgM IgG ) . Так же важным является способность данного анализа определять количество выявляемых антител. В итоге определение типа антител и его количественной составляющей позволяет сделать ряд выводов о длительности заболевания, динамике процесса, активности возбудителя и иммунной системы пациента. В итоге данный анализ оказался незаменимым в деле диагностики инфекционных заболеваний, а так же как контроль динамики заболевания на фоне проводимого лечения.

3. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Данная реакция основывается на иммунологически индуцированном склеивании эритроцитов. Механизм данной реакции заключается в том, что предварительно подготавливаются эритроциты, на поверхности которых фиксированы белковые компоненты бледной трепонемы. Потому, при смешивании с плазмой крови, содержащей антитела к трепонеме, происходит склеивание эритроцитов – кровь из красной превращается в зернистую. Положительной реакция гемагглютинации становится спустя 4 недели после инфицирования. После успешного лечения сифилиса данная реакция в течение всей жизни может оставаться положительной.

Из вышеизложенного понятно, что дело диагностики, контроля эффективности лечения и излеченности – достаточно сложная и трудоемкая работа. А уж пациенту, не имеющему медицинского образования разобраться в целях и результатах исследования невозможно. Однако мы постараемся изложить в доступной форме динамику иммунологических изменений на разных стадиях сифилиса, и лабораторные показатели выявляющие данные изменения.

Итак – немного теории. После инфицирования иммунные клетки впервые встречаются с бледной трепонемой. Идентифицируя ее как чужеродный микроорганизм, иммунокомпетентные клетки начинают активное формирование иммунного ответа. Антитела, специфически действующие на бледные трепонемы класса IgM , обнаруживаются в крови пациента спустя 7 дней после инфицирования, антитела IgG синтезируются позже – спустя через 4 недели. Эти 2 класса антител различны по своей структуре, но важно для диагностики то, что IgM синтезируется на ранних стадиях инфицирования (что говорит о недавнем инфицировании ) или при наличии высокой активности инфекции. Выявление IgG говорит лишь о формировании стойкого иммунитета к данной инфекции, лишь серия анализов титра антител в динамике позволяет оценить излеченность заболевания или активность инфекции. Антилипидные (неспецифические ) иммунологические комплексы активно синтезируются спустя 4 - 5 недель после инфицирования.
Важными является тот факт, что в период клинических проявлений сифилиса в крови выявляются специфичные для бледной трепонемы антитела как IgM , так и класса IgG (суммарные антитела ). Важным параметром в процессе лечения является изменение количественных параметров антител. Правильно подобранное лечение способствует резкому снижению концентрации IgM , на фоне стабильного уровня IgG – эти показатели говорят о сформировавшемся стойком иммунитете к бледной трепонеме на фоне снижения ее инфекционной активности. Необходимо обратить внимание на то, что специфические антитела к трепонеме могут сохраняться в крови человека на долгие годы, давая положительные результаты некоторых видов исследований.

Как интерпретировать результаты серологических исследований?

Реагиновые тесты используются для массового обследования пациентов на сифилис. Их обычно проводят в рамках профилактических осмотров. Такие тесты доступны в каждом лечебном учреждении и проводятся быстро. Ответ обычно готов спустя 30-40 минут.

Положительный результат при проведении реагиновых реакций не является критерием для постановки диагноза. Необходимо дополнительно провести видоспецифические исследования.

Самым распространенным скрининговым методом является реакция Вассермана. При ее проведении используются кардиолипиновый и трепонемный антигены. Если в сыворотке крови нет реагинов, то произойдет гемолиз эритроцитов барана, которые добавляются в качестве индикатора.

При наличии реагинов цельные эритроциты выпадут в осадок, в этом случае реакция считается положительной.

Реагиновые в следующих случаях:

• другие заболевания, возбудители которых по антигенной структуре схожи с бледной спирохетой
• беременность
• онкологические заболевания
• прием салицилатов
• инфаркт миокарда
• технические ошибки при проведении анализа

При положительном результате реагиновой реакции проводятся специфические серологические тесты. Также их назначает, если отрицательный результат вызывает сомнения.

Трепонемные антигены используются в таких анализах, как РИФ, РИТ, ИФА, РПГА, реакция гемадсорбции в твердой фазе. Эти реакции основаны на образовании комплексов антиген-антитело и различаются методикой их определения. Чаще всего используется реакция иммунофлюоресценции.

Препарат обрабатывается люминесцирующей сывороткой, что позволяет определить иммунные комплексы под люминесцентным микроскопом.

Одной из самых чувствительных серологических реакций, позволяющих диагностировать сифилис, является РПГА. Метод обладает высокой точностью. Его часто используется для верификации диагноза при беременности, когда другие анализы могут давать ложноположительный результат.

Особенности серодиагностики

Для проведения серологической диагностики сифилиса в разных его периодах производят забор крови из вены. Анализ рекомендуется проводить натощак, это снижает количество ложноположительных результатов. Пробирка должна быть стерильной. При проведении экспресс тестов в ряде случаев берут кровь из пальца.

При подозрении на для серодиагностики берут спинномозговую жидкость. Для ее анализа используются те же методики, что и при исследовании крови.

Для диагностики сифилиса пройдите полное обследование в нашей клинике.